导读:本文包含了双价抗虫载体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:辣椒,体系优化,双价抗虫,Bt
双价抗虫载体论文文献综述
康瑜[1]（2013）在《Bt和CpTI双价抗虫表达载体转化辣椒的研究》一文中研究指出辣椒(Capsicum annuum L.)是常见的蔬菜,营养及药用价值高,市场需求量大。在生产实践中,虫害严重影响了辣椒的产量和品质,基因工程育种技术的发展为培育抗虫辣椒品种提供了新途径。本实验以两个辣椒材料‘S1’和‘405’为试材,研究了不同基因型、不同外植体类型、不同BR.浓度、不同甘露糖浓度等对辣椒遗传再生的影响,优化了辣椒的再生体系。本实验采用农杆菌介导法实现外源基因的转化,并获得了转双价抗虫基因的辣椒新材料。试验结果如下：1.带柄子叶、类Flamingo-bill、下胚轴叁种不同类型外植体的分化率比较发现：类Flamingo-bill的再生及分化能力最强,最高分化率达47.0%,下胚轴次之,带柄子叶分化率最低,几乎不分化。2.对两个辣椒材料外植体不定芽再生率进行比较发现：辣椒材料‘S1’为较好的离体再生基因型,不定芽的诱导率达47.0%,而辣椒材料‘405’分化率最高分化率为30.0%。表明辣椒材料‘S1’的再生分化能力比辣椒材料‘405’的再生能力强。3.研究不同浓度BR对辣椒不定芽诱导率的影响发现：在培养基中加入浓度在0.001-0.01mg/L范围的BR溶液能有效提高辣椒不定芽的诱导率,其中以BR=0.01mg/L时辣椒不定芽的诱导率最高。4.研究不同浓度甘露糖对辣椒不定芽诱导率和抗性芽筛选效果的影响发现：当甘露糖／蔗糖=18g/L/12g/L时,筛选效果最佳。5.利用本实验优化的遗传再生体系获得了两个辣椒品种的转基因植株,经过PCR检测,Southern杂交检测证实两个抗虫基因已经成功整合到辣椒的基因组中。其中,PCR阳性率为16.40%,转化率为0.55%；Southern杂交检测结果表明共有5株辣椒植株呈阳性,阳性率为45.45%。6.对11株PCR呈阳性辣椒植株进行氯酚红检测,对5株Southern杂交检测呈阳性辣椒植株RT-PCR检测及饲虫实验发现：Bt基因和CpTI基因在转基因植株内实现了表达。这一批T0辣椒的获得,为后期田间选育辣椒双价抗虫新品种提供了原材料。(本文来源于《湖南农业大学》期刊2013-04-01）
康瑜,肖深根,王恒明,徐小万,李颖[2]（2012）在《Bt和CpTI双价抗虫表达载体转化辣椒的研究》一文中研究指出虫害一直是影响辣椒产量及品质的重要因素,常规的化学防治方法存在农药残留、害虫产生抗性等危害;基因工程技术的发展为辣椒虫害的防治提供了一条新途径。现有的抗虫基因主要包括Bt基因、豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(CpTI)以及植物凝集素基因等。本研究采用Bt和CpTI双价表达载体转化辣椒,目的是为了得到具有高效及抗虫广谱性的辣椒转基因材料。本试验采用的抗性植株(本文来源于《中国园艺学会2012年学术年会论文摘要集》期刊2012-10-20）
杨俊杰[3]（2012）在《植物表达双价抗虫载体pCAMBIA3300-bt-pta的构建》一文中研究指出本研究将苏云金芽孢杆菌(bt)与半夏凝集素抗虫基因(pta)两类抗虫基因连接到具有高效性的植物表达载体pCAMBIA3300中,重组表达质粒分别经过ApalI单酶切及XhoI和KpnI双酶切鉴定、分析后,实验结果表明含有双价抗虫基因pCAMBIA3300-bt-pta的植物重组表达质粒已构建成功。(本文来源于《齐鲁师范学院学报》期刊2012年05期）
张平[4]（2011）在《含cry1Ac和vip3A双价抗虫基因植物表达载体的构建及其对水稻的转化》一文中研究指出水稻(Oryza sativa)是世界上最重要的粮食作物之一。虫害引起的水稻减产,给人们带来了巨大的经济损失。传统的化学农药防治方法污染环境、毒杀非靶标昆虫；新型的微生物杀虫制剂使用安全但是见效慢,价格昂贵；目前,利用转基因技术培育出抗虫水稻成为提高水稻产量最重要的手段之一。研究表明,转两个或者多个具有不同作用位点和作用机理的毒素蛋白是增强杀虫活性、延缓靶标害虫对转基因作物产生抗性最好的措施。苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)产生的杀虫晶体蛋白(insecticidal crystal protein, ICP)Cry1Ac对棉铃虫、甜菜夜蛾、二化螟等鳞翅目昆虫有特异毒杀作用,非晶体营养期杀虫蛋白(vegetative insecticidal protein,VIP)Vip3A对鳞翅目昆虫有广泛的毒杀作用,甚至对一些产生ICP抗性的害虫也具有高效的毒杀作用。Vip3A蛋白被称为第二代杀虫蛋白,它在靶标昆虫体内的受体位点及作用机理与第一代杀虫蛋白Cry类晶体蛋白完全不同。本研究拟利用农杆菌(Agrobacterium tumefaciems)介导法将来自苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)的crylAc和vip3A双价基因导入水稻粳稻品种台北309(Oryza sativa cv. Taipei 309),为转基因抗虫水稻研究探索奠定基础。主要研究结果如下：1.利用最新发明的“叁重同源重组”技术快速构建了含双价杀虫基因的植物表达载体pCMUASV,包括玉米泛素启动子(Ubiquitin promoter)驱动的杀虫晶体蛋白基因cry1Ac、花椰菜叶病毒启动子(CaMV35 S promoter)控制的营养期杀虫蛋白基因vip3A。2.利用农杆菌介导法,以水稻粳稻品种台北309(Oryza sativa cv.Taipei309)的胚性愈伤组织为受体,经过过潮霉素筛选培养,分化培养,生根培养,获得了10株转基因植株。3.对10株转基因植株进行分子检测。PCR扩增实验初步证实10株转基因植株均为阳性植株,阳性率为100%。(本文来源于《湖南师范大学》期刊2011-06-01）
郑巨云[5]（2008）在《Bt基因与ARA基因双价抗虫基因表达载体的构建及转化油菜研究》一文中研究指出本实验将苏云金芽孢杆菌伴孢晶体蛋白的基因(Bacillus thuringiesis,简称Bt)与反枝苋菜凝集素基(Amaranthus retroflexus agglutinin, ARA)构建成双价基因的表达载体,编码两种蛋白,既能抗鳞翅目害虫,又能抗同翅目害虫。将双价基因载体转化油菜。构建ARA基因原核表达载体pET-ARA和Bt基因原核表达载体pET-Bt,经IPTG诱导后,pET-ARA/E coli BL21表达出分子量为36kDa的特异蛋白,pET-Bt/E coli BL21表达出分子量为73.7kDa的特异蛋白,与理论计算的分子量大小相符。随着诱导时间的延长,表达蛋白的积累量也增加。这说明Bt基因和ARA基因在微生物中能够表达,而且阅读框架完整,未发生提前终止现象。构建双价抗虫基因的植物表达载体pBI-Bt-BA,Bt基因表达单元中的CaMV35s和?序列为带增强子的35启动子序列,ARA基因表达单元的启动子-BSP为韧皮部特异启动子。经过限制性酶切分析和PCR鉴定,结果表明含有双价基因的真核重组表达质粒已构建成功。用农杆菌介导和激光微束穿刺法将双价抗虫基因植物表达载体转化油菜,得到转基因的油菜植株。进行PCR扩增,转基因阳性植株基因组PCR产物,在琼脂糖电泳结果中有1.8kb和915bp左右和的条带,初步说明双价抗虫基因已经转入油菜中。Southern blot结果所检测的7个植株有1-2个特异的杂交带,非转基因植株没有杂交带,阳性对照在预期的位置有两条杂交带。这样初步证明了7个植株基因组有Bt-BA基因的插入,其插入的拷贝数有的为1,有的为2。对转基因和非转基因植株进行接虫对比实验,结果显示转基因植株具有一定的抗虫性。(本文来源于《新疆农业大学》期刊2008-05-01）
熊恒硕,康俊梅,杨青川,孙彦,唐克轩[6]（2008）在《双价抗虫植物表达载体p3300-bt-pta转化苜蓿的初步研究》一文中研究指出以中苜1号无菌苗子叶为外植体,采用农杆菌介导的叶盘法,将含有CryIA(a)/CryIA(c)基因、半夏凝集素(pta)基因和bar基因的双价抗虫植物表达载体p3300-Bt-pta导入苜蓿子叶中,在含除草剂的筛选培养基中连续筛选,获得抗性转化植株。研究了农杆菌菌液浓度、浸染时间、共培养时间等因素对苜蓿转化效率的影响,结果表明:各因素对苜蓿转化率均有不同程度的影响,当转化的菌液浓度OD600为0.6、浸染时间为10min、共培养时间为3d时转化效率较好。载体的抗性基因为除草剂草丁膦抗性的Bar基因,对子叶外植体的最佳筛选浓度为8mg/L;抑制农杆菌所用Carb的有效工作浓度为400mg/L,以后继代逐次减少用量到100mg/L;按此方法以根癌农杆菌菌株EHA105介导,将双基因Bt和pta导入紫花苜蓿品种"中苜1号",最终获得122棵除草剂草丁膦(ppt)抗性的植株,经过初步的PCR及RT-PCR分子生物学检测,有30棵检测到特异性条带,表明外源基因已成功整合到苜蓿基因组中,并在转录水平得到表达。(本文来源于《中国草地学报》期刊2008年01期）
张志云,张虎生,孙毅,梁爱华[7]（2004）在《双价抗虫基因植物表达载体的构建》一文中研究指出将蝎毒基因BmKITS和几丁质酶基因chitinase2个抗虫基因采用不同的启动子ubi或35S,连到2个高效的植物表达载体pWM101和pBI101中,2个重组表达质粒分别经过限制性酶切分析和PCR鉴定,实验结果表明2个含有双价抗虫基因的植物重组表达质粒均已构建成功.(本文来源于《西北植物学报》期刊2004年08期）
张志云,张虎生,孙毅,梁爱华[8]（2004）在《双价抗虫基因植物表达载体的构建》一文中研究指出将蝎毒基因BmKITS和几丁质酶基因chitinase 2个抗虫基因采用不同的启动子ubi或35S,连到2个高效的植物表达载体pWM101和pBI101中,2个重组表达质粒分别经过限制性酶切分析和PCR鉴定,实验结果表明2个含有双价抗虫基因的植物重组表达质粒均已构建成功。(本文来源于《2004年北方七省市植物学年会论文集》期刊2004-06-30）
范媛媛,庞永珍,吴为胜,姚剑虹,唐克轩[9]（2004）在《双价抗虫植物表达载体p3300-bt-pta的构建及转基因烟草的初步检测》一文中研究指出用限制性内切酶HindⅢ酶切分别含有CryIA(a)和CryIA(c)基因的pGEM-4zf质粒得到Ubiquitin(玉米泛素)基因启动子驱动的CryIA(a)和CryIA(c)基因表达盒,将它们分别插入到用HindⅢ开环的pCAMBIA3300(含编码抗除草剂草丁膦的bar基因)载体上形成中间载体p3300-bt。采用Pfu高保真DNA聚合酶用PCR的方法从质粒pBI121-pta上扩增得到含CaMV35S启动子和NOS终止子的pta基因表达盒,然后插入到用SmaⅠ切开的中间载体p3300-bt中,获得带有抗性基因的双价抗虫基因表达载体p3300-bt-pta。通过根癌农杆菌介导的叶盘法转化烟草品种百日红,获得一批抗除草剂的转基因烟草植株。(本文来源于《上海交通大学学报(农业科学版)》期刊2004年01期）
王志斌,郭叁堆[10]（1999）在《双价抗虫基因植物表达载体的构建及其在烟草中的表达》一文中研究指出利用人工合成及密码子优化后的雪花莲凝集素 （ＧＮＡ） 基因， 与人工合成的ＧＦＭ ｃｒｙＩＡ构建了双价基因中间载体。双价基因进一步亚克隆到植物表达载体ｐＢＩ１２１．１上， 获得了带有两个抗虫基因ｃｒｙＩＡ及ＧＮＡ基因的高效植物表达载体ｐＧＷ４ＢＡＩ， 在载体中两基因的５′端、３′端各加入与在植物中能增强基因转录和翻译有关的调控元件。通过根癌农杆菌介导叶盘法转化烟草Ｋ３２６， 获得２８株卡那霉素抗性植株， 随机抽取１７株经ＰＣＲ及进一步Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 印迹检测，证实了双价抗虫基因在烟草基因组中的整合。转基因烟草杀棉铃虫试验表明４０％ 的转基因烟草植株对棉铃虫具有高抗性； 抑制蚜虫试验表明有效降低了蚜虫繁殖率， 转基因植株抑制蚜口密度为３０％ ～８５％ 不等， 并且获得了数株兼抗棉铃虫及蚜虫效果均良好的转基因烟草植株。(本文来源于《高技术通讯》期刊1999年11期）
双价抗虫载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
虫害一直是影响辣椒产量及品质的重要因素,常规的化学防治方法存在农药残留、害虫产生抗性等危害;基因工程技术的发展为辣椒虫害的防治提供了一条新途径。现有的抗虫基因主要包括Bt基因、豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(CpTI)以及植物凝集素基因等。本研究采用Bt和CpTI双价表达载体转化辣椒,目的是为了得到具有高效及抗虫广谱性的辣椒转基因材料。本试验采用的抗性植株
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
双价抗虫载体论文参考文献
[1].康瑜.Bt和CpTI双价抗虫表达载体转化辣椒的研究[D].湖南农业大学.2013
[2].康瑜,肖深根,王恒明,徐小万,李颖.Bt和CpTI双价抗虫表达载体转化辣椒的研究[C].中国园艺学会2012年学术年会论文摘要集.2012
[3].杨俊杰.植物表达双价抗虫载体pCAMBIA3300-bt-pta的构建[J].齐鲁师范学院学报.2012
[4].张平.含cry1Ac和vip3A双价抗虫基因植物表达载体的构建及其对水稻的转化[D].湖南师范大学.2011
[5].郑巨云.Bt基因与ARA基因双价抗虫基因表达载体的构建及转化油菜研究[D].新疆农业大学.2008
[6].熊恒硕,康俊梅,杨青川,孙彦,唐克轩.双价抗虫植物表达载体p3300-bt-pta转化苜蓿的初步研究[J].中国草地学报.2008
[7].张志云,张虎生,孙毅,梁爱华.双价抗虫基因植物表达载体的构建[J].西北植物学报.2004
[8].张志云,张虎生,孙毅,梁爱华.双价抗虫基因植物表达载体的构建[C].2004年北方七省市植物学年会论文集.2004
[9].范媛媛,庞永珍,吴为胜,姚剑虹,唐克轩.双价抗虫植物表达载体p3300-bt-pta的构建及转基因烟草的初步检测[J].上海交通大学学报(农业科学版).2004
[10].王志斌,郭叁堆.双价抗虫基因植物表达载体的构建及其在烟草中的表达[J].高技术通讯.1999