论文摘要
为探讨利用白细胞介素5作为佐剂增强粘膜免疫反应,提高卵透明带DNA避孕疫苗的抗生育效能的可行性,本研究首先以含有小鼠白细胞介素5（mIL-5）cDNA的质粒为模板,PCR扩增44～445之间的DNA片段（含信号肽和成熟肽序列）,以质粒pVAX1为载体构建了真核细胞表达质粒pVAX1-mIL-5。通过脂质体转染导入HeLa细胞,并采用间接免疫荧光技术（IIF）检测到了mIL-5在HeLa细胞中的表达。然后,用壳聚糖C390和重组质粒pVAX1-mIL-5制备纳米微粒,经测定壳聚糖对质粒DNA的包裹率达95%以上。用pVAX1-mIL-5和卵透明带避孕疫苗pVAX1-pZP3α壳聚糖纳米微粒口服免疫小鼠。实验小鼠分为三组,每组6只雌鼠。A组单独用卵透明带DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3α免疫,B组以pVAX1-mIL-5质粒为佐剂,与DNA疫苗共免疫,C组为空白对照组,每组动物接受3次免疫（0、3、6周）。用ELISA法检测小鼠血清及阴道分泌液中抗ZP3 IgA抗体反应。结果发现B组全部小鼠血清抗体均呈阳性反应（1g OD免疫后/OD免疫前>0.3）,而A组只有两只小鼠血清抗体呈阳性反应,B组小鼠的抗体滴度水平均比A组小鼠高。首次免疫后第10周,实验动物与有生育力的雄鼠合笼,评价其抗生育效能。结果显示,B组小鼠的抗生育率为100%,A组小鼠为50%,C组小鼠为0%。x2检验分析结果表明有统计学差异。其抗生育作用与交配时的抗ZP3 IgA抗体滴度有关。首次免疫后第13周,处死动物,对卵巢切片组织病理学观察结果表明,有抗生育效果的小鼠的卵巢组织可观察到各级形态正常的卵泡,无淋巴细胞浸润,与对照组及无抗生育效果的小鼠的卵巢结构无差异。本研究的结果初步表明,利用重组质粒pVAX1-mIL-5与卵透明带DNA疫苗共同免疫小鼠,能增强疫苗诱发粘膜免疫反应的能力,提高卵透明带DNA避孕疫苗的抗生育率,在本研究实验时间范围内没有观察到小鼠的卵巢组织结构发生病理学改变。