鼻咽癌耐药细胞株14-3-3σ表达研究临床检验诊断学

论文摘要

目的：研究14-3-36基因在鼻咽癌细胞株HNE1和耐顺铂的鼻咽癌细胞株HNE1-DDP中的表达及其启动子区域的甲基化情况,初步探讨14-3-3σ基因与耐药的关系。方法：首先采用蛋白印迹法（Western Blotting）检测H（?）NE1-DDP细胞与HNE1细胞14-3-36的表达,并采用荧光定量PCR（Quantitative PCR,qPCR）检测14-3-36基因的mRNA表达水平。然后利用甲基化抑制剂5-杂氮-2’-脱氧胞苷处理HNE1-DDP细胞,观察不同浓度对细胞生长及细胞周期的影响,并采用Western Blotting及qPCR分别检测药物干预前后14-3-36基因表达的改变。用Western Blotting检测p53蛋白在HNE1及HNE1-DDP中的表达,并采用亚硫酸氢钠处理后测序法（Bisulfite genomic sequencing PCR）检测14-3-36启动子区域CpG位点的甲基化情况。采用SPSS13.0统计软件进行数据分析。结果：较HNE1细胞,14-3-3σ蛋白及其mRNA、p53蛋白在HNE1-DDP细胞株中表达均明显下降。经过不同浓度的5-aza-2’-dC（0,1,5,10μmol/L）处理HNE1-DDP细胞后,细胞生长曲线出现明显差异,细胞活性抑制,细胞阻滞在S期和G2-M期。同时,随着药物的处理,HNE1-DDP细胞的14-3-36蛋白和mRNA重新表达并逐渐上升。此外,亲本细胞株HNE1、耐药细胞株HNE1-DDP及处理后的细胞株中,14-3-3σ启动子区域的CpG位点几乎均为非甲基化状态。结论：14-3-36下调与鼻咽癌耐药相关,提示14-3-36可能是鼻咽癌耐药相关的蛋白。5-aza-2′-dC具有抑制鼻咽癌耐药细胞株生长、阻滞耐药细胞株周期和上调14-3-36的作用,且14-3-36可能也参与了药物的抑制作用。但在鼻咽癌耐药细胞株HNE1-DDP中14-3-36表达下调可能不是由于其甲基化所致,而和抑瘤蛋白p53的表达下降有关,但具体机制有待进一步研究。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 英文縮略词表
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 主要实验材料
• 2.2 实验方法
• 2.3 统计学处理
• 第三章 结果
• 3.1 耐顺铂鼻咽癌细胞株HNE1-DDP耐药性的验证
• 3.2 HNE1-DDP细胞株及HNE1细胞株14-3-3σ蛋白的表达
• 3.3 HNE1-DDP细胞株及HNE1细胞株14-3-3σmRNA表达水平
• 3.4 5-aza-2'-dC对HNE1-DDP细胞生长的影响
• 3.5 5-aza-2'-dC对HNE1-DDP细胞周期的影响
• 3.6 经5-aza-2'-dC处理后HNE1-DDP细胞14-3-3σ蛋白的表达
• 3.7 经5-aza-2'-dC处理后HNEl-DDP细胞14-3-3σmRNA表达
• 3.8 BSP分析HNE1-DDP细胞及HNE1细胞14-3-3σ基因启动子区域甲基化
• 3.9 HNE1-DDP细胞株及HNE1细胞株p53蛋白的表达
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间主要的研究成果