五灵肩周丸镇痛抗炎作用及毒性研究

论文摘要

研究背景与目的：肩周炎是指发生于肩关节周围软组织的无菌性炎症,好发于50岁左右的体力劳动者,临床表现为不同程度的肩关节疼痛,活动受限,如得不到及时的有效治疗,会使病情反复,甚至出现废用性肌肉萎缩,引起严重的肩关节运动障碍,形成“炎症渗出→粘连形成→疼痛加剧→活动减少→肌肉萎缩”的恶性循环,给患者的工作和生活带来极大的不便。肩周炎一般分为急性期,粘连期和僵冻期,急性期阶段肩周尚未发生粘连,若此时及时用药物进行干预,消除局部无菌性炎症,解除肩周肌肉痉挛,再配合适当的功能锻炼,能逆转肩周炎的发展,建立起“疼痛缓解→渗出吸收→功能恢复→组织复原”的良性循环,是治疗肩周炎的最佳时机。肩周炎的药物治疗包括中药和西药,西药主要有非甾体类镇痛抗炎药如阿司匹林、消炎痛等；中药治疗以复方中药为主,以温经散寒、活血化瘀、通络止痛为原则,临床用于治疗早期肩周炎效果显著。五灵肩周水煎剂是临床用于治疗肩周炎的经验方之一,由独活、威灵仙、姜黄、秦艽、五加皮等中药组成,临床证实其疗效明显,大部分患者能得到改善。但五灵肩周水煎剂煎煮费时,外出不能按时服用,使患者服药的依从性降低,因此,本课题对四种不同提取工艺制备的五灵肩周丸进行镇痛抗炎筛选,并对最佳工艺制备的五灵肩周丸进行安全性评价,以期改变剂型后的五灵肩周丸更便于肩周炎患者服用、携带和贮藏。方法和内容：1.甲醛致痛实验：NIH小鼠按体重随机分为阴性对照组（0.5%CMC-Na溶液）、各提取工艺低剂量组（3.8g生药/kg）和高剂量组（11.4g生药/kg）、阳性对照组（吲哚美辛0.025g/kg）,阴性与阳性对照每组20只,其余每组10只,雌雄各半。各组连续灌胃给药3d,末次给药1h后,于小鼠左后肢足跖部皮下注射1%甲醛溶液25ul,分别记录注射甲醛溶液后0-5min（I相）和20-30min（Ⅱ相）内小鼠疼痛反应的累计时间并进行评分。2.大鼠肉芽肿实验：SD大鼠按体重随机分成阴性对照组（0.5%CMC-Na溶液）、各种提取工艺低剂量组（2.55g生药/kg）和高剂量组（7.64g生药/kg）、阳性对照组（醋酸泼尼松0.04g/kg）,阴性与阳性对照组每组12只,其余每组6只,雌雄各半。乙醚麻醉大鼠后在腹股沟皮下埋入重约50mg的棉球,术后连续灌胃给药10d,末次给药24h后,处死大鼠并取出肉芽于50℃的烘箱中烘干,称量其干重。3.醋酸扭体实验：NIH小鼠按体重随机分为5组,分别为阴性对照组、五灵肩周丸高、次高、中、低剂量组,阳性对照组,每组10只,雌雄各半,依次给予0.5%CMC-Na、1.9、3.8、7.6、15.2g生药/kg五灵肩周丸、0.015g/kg吲哚美辛,每天灌胃给药1次,持续3d。末次给药30min后按0.01ml/g体重腹腔注射浓度为0.6%的醋酸溶液,观察并计算每只小鼠在注射醋酸后15min内的扭体次数并计算镇痛率。4.耳肿胀实验：动物按醋酸扭体实验的设计进行分组和给药,末次给药后30min,在小鼠右耳前后两面涂布二甲苯0.025ml,30min后,处死动物并用直径为6mm的打孔器在耳朵同一部位打下左右耳的圆耳片,分别称重,计算小鼠耳朵肿胀度和肿胀抑制率。5.急性毒性试验：在药物的Dm与Dn间按1:0.85并设置6个受试剂量,分别为96.2、113.2、133.1、156.6、184.3、216.8g生药/kg,昆明小鼠按上述剂量分成6组,每组12只,雌雄各半,另设阴性对照组（生理盐水）,采用1次灌胃法（40ml/kg）给药,给药后观察各组动物的状态与活动,持续14d,并记录各组动物死亡情况,计算药物的LD50与LD5.6.长期毒性试验：SD大鼠按体重随机分成4组,每组24只,雌雄各半,分别为阴性对照组、低、中、高剂量组,每天1次灌胃（10ml/kg）,分别给予蒸馏水、4.0、20.0、40.0g生药/kg的五灵肩周丸。每天观察动物的状态,每周记录动物的体重和摄食量,并根据大鼠体重增长情况调整给药剂量1次。持续给药3个月后,按体重每组随机抽取12只动物,雌雄各半,于末次给药后24h,戊巴比妥麻醉大鼠并收集血样进行血液学检测和血液生化学检测,肉眼观察器官是否发生病变,摘取胸腺、脑、肝脏、肾脏、肾上腺、脾脏、心脏、附睾、睾丸（卵巢、子宫）等器官并计算器官系数；剩余的动物停药继续饲养1个月,每天观察1次动物的状态,每周1次记录体重和摄食量,1个月后按上述方法进行麻醉、采血检测、尸检、称量器官。结果：1.甲醛致痛实验：与阴性对照组比较,水提取工艺高剂量、提取工艺B和提取工艺C的低、高剂量均能显著地减轻甲醛引起的Ⅰ相疼痛反应,但对Ⅱ相的镇痛作用并不显著；大鼠肉芽肿实验：提取工艺B高剂量组、提取工艺C低、高剂量的五灵肩周丸对大鼠肉芽肿的形成有显著的抑制作用。2.醋酸扭体实验：3.8、7.6、15.2g生药/kg五灵肩周丸对醋酸引起的小鼠扭体疼痛反应有显著的抑制作用；耳肿胀实验：五灵肩周丸剂量为3.8、7.6g生药/kg时对二甲苯所致耳肿胀有显著的抑制作用。3.急性毒性试验：动物死亡前见活动减少,对外界刺激减弱,存活动物无明显异常；解剖肉眼观察未见特异性脏器病变。采用Bliss法计算,小鼠的LD50=148.4g生药/kg；LD5=110.7g生药/kg。4.长期毒性试验：给药期：一般指标：动物未见异常；体重：中、高剂量受试药能显著地降低雄鼠体重,但对雌鼠的体重基本没有影响；摄食量：总体认为药物对大鼠的摄食量影响很小或基本没有；血液学指标：中剂量组雄鼠的中性粒细胞显著高于阴性对照组,中、高剂量组的平均红细胞血红蛋白显著地低于阴性对照组,但该值仍处于正常范围；药物对雌鼠的血液学基本没有影响；血液生化指标：中、高剂量药物显著降低雄鼠的甘油三酯,高剂量对雌鼠的钾有一定升高作用,但该变化在正常生理波动范围。尸检：肉眼未观察到特异性脏器病变；脏器系数：中、高剂量药物显著增大雄鼠的肝脏、肾脏、睾丸及附睾系数,中、高剂量药物也能显著增大雌鼠的肝脏系数。恢复期：一般指标：动物未见异常；体重：与阴性对照组相比各剂量组大鼠的体重没有显著性的差异,说明停药后雄鼠的体重已经恢复至正常；摄食量：与阴性对照组相比,雌鼠和雄鼠的摄食量仍有一定的显著性差异,但经分析不能认为是药物的后遗效应引起的；血液学指标：低剂量组雄鼠的红细胞数目、中剂量组雄鼠的血红蛋白和红细胞比积与阴性对照组有显著性差异,但经分析,差异无剂量依赖性,且属于正常的生理波动范围,雌鼠的各个血液学指标与阴性对照组相比均没有统计学差异,因此可认为恢复期内动物的血液学指标并无异常；血液生化指标：低剂量组雄鼠氯离子浓度与尿素氮、低剂量组雌鼠的白蛋白与阴性对照组动物相比有统计学差异,但所有的值仍在正常生理波动范围,且无剂量依赖性,低剂量组雌鼠总胆红素虽然明显的高于阴性对照组,但差异仅出现在低剂量组,经综合性分析,可认为恢复期内雌雄大鼠的血液生化学指标并没有出现异常。尸检：肉眼未观察到特异性脏器病变;脏器系数：雄鼠和雌鼠的脏器系数与阴性对照组相比没有统计学差异,即在停药1个月后动物脏器相对重量已得到恢复。结论：1.提取工艺C制备的五灵肩周丸镇痛抗炎活性最佳2.提取工艺C制备的五灵肩周丸在剂量3.8至15.2g（生药）/kg的范围内有显著的镇痛作用,在3.8至7.6g生药/kg范围内有显著的抗炎作用。3.药物对KM小鼠的LD50=148.4g生药/kg,95%可信区间为（138.1-159.5）g生药/kg；LD5=110.7g生药/kg,95%可信区间为（97-126.3）g生药/kg。4.五灵肩周丸生药剂量为4生药/kg时,在给药期与恢复期各组均无动物死亡,且未见明显的毒副反应,根据体重、摄食量、器官系数、血液学、血液生化学、系统尸检结果分析,五灵肩周丸在治疗范围内对大鼠没有毒性。在剂量20-40g生药/kg范围内对大鼠的体重,部分器官系数、血液学及血液生化指标有一定的影响,但均在停药1个月内得到恢复,因此仍可认为中、高剂量的五灵肩周重复给药安全性较高。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一章 五灵肩周丸提取工艺的筛选
• 一、实验材料与方法
• 二、实验结果
• 三、实验结论
• 第二章 五灵肩周丸镇痛抗炎活性剂量的研究
• 一、实验材料与方法
• 二、实验结果
• 三、实验结论
• 第三章 五灵肩周丸的毒性研究
• 一、实验材料与方法
• 二、实验结果
• 三、实验结论
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 硕士期间发表论文
• 致谢
• 统计学合格证明