松材线虫枯萎病疫木上的蓝变菌研究

论文摘要

本文从浙江宁海及云南紫溪山采集感染松材线虫的马尾松蓝变木材和感染拟松材线虫的云南松蓝变木材,针对松枯萎病疫木上的蓝变菌进行研究,研究其分类学、致病性,在主要对前两种松树分离的同时,分离了在大兴安岭采集的偃松样品。3种样品通过用培养基分离与木块保湿分离2种方法从马尾松、云南松、偃松木材中分离纯化出679株真菌,经变色实验筛选出21株蓝变菌,通过形态及分子方法鉴定,确定此21株蓝变菌菌株属7属11种蓝变菌,包括Leptographium abietinum、Ophiostomaaenigmaticum、Leptographium aenigmaticum、Botryosphaeria obtusa、Pleosporaceaesp.1、Phomopsis sp.1、Phomopsis sp.2、Pleosporaceae sp.2、Pleosporaceae sp.3、Botryodiplodia sp.、Sphaeropsis sp.。其中L.abietinum、O.aenigmatinum、L.aenigmaticum通过形态鉴定确定为中国新纪录种。将从3种松树中所分离得到的蓝变菌菌株进行致病性测定,测试方法采用生测法,用培养3个月的木质化的马尾松苗木浸渍在摇培30d的蓝变菌过滤菌液中,每隔12h观察一次苗木变化情况,结果表明,L.abietinum致病性最强,5d可使马尾松苗木整株枯萎,其次是D.aenigmatinum、L.aenigmatinum,其它菌株对马尾松苗木也存在不同程度的致病性,而B.obtusa、Pleosporaceae sp.2、Phomopsis sp.2、Pleosporaceae sp.3几乎无致病性,在30d内马尾松苗木与对照相比几乎无变化。针对致病性最强的菌株L.abietinum研究其生物学特性及致病机理。生物学特性结果表明,在PDA培养基上,菌丝生长最适条件,温度为25℃,黑暗,pH为5.9,最适碳源为蔗糖,最适氮源为硝酸钾;最适产孢条件,温度为25℃,黑暗,pH为7.0,最适碳源为蔗糖,最适氮源为尿素。在生物学特性研究结果的基础上进行致病机理测定。以Czapek’s琼脂为基础培养基,将氮源硝酸钾替换为尿素,接入L.abietinum菌种,摇培30d后,过滤培养液,对过滤液进行热稳定性测定,同时用茚三酮、FeCI3、CaCI23种试剂测定过滤液中主要致病物质,结果表明过滤液具有热不稳定性,其中含有蛋白质类物质和糖蛋白,进一步确定实验证明L.abietinum可以产生毒素,其毒素中的致病物质为蛋白质和糖蛋白。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 绪论
• 1.1 国内外研究概况
• 1.1.1 蓝变菌与松材线虫的关系
• 1.1.2 目前国内外发现的蓝变菌
• 1.1.3 蓝变菌与小蠹虫的关系
• 1.1.4 蓝变菌的致病性及致病机理的研究
• 1.1.5 木材蓝变的防治
• 1.2 本论文研究的目的意义
• 2 松枯萎病蓝变菌分类研究
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 分离材料
• 2.1.2 培养基
• 2.1.3 药品
• 2.1.4 实验辅助用具
• 2.2 研究方法
• 2.2.1 蓝变菌的分离方法
• 2.2.2 菌种纯化方法
• 2.2.3 变色试验方法
• 2.2.4 菌种鉴定方法
• 2.3 结果分析
• 2.3.1 蓝变菌的分类结果
• 2.4 本章小结
• 3 Leptographium abietinum生物学特性及其致病性研究
• 3.1 实验材料
• 3.1.1 实验用品
• 3.1.2 药品
• 3.1.3 实验辅助用具
• 3.2 生物学特性测定方法
• 3.2.1 温度对生长速度、产孢量的影响
• 3.2.2 光照对生长速度和产孢量的影响
• 3.2.3 pH值对生长速度和产孢量的影响
• 3.2.4 不同碳源对生长速度和产孢量的影响
• 3.2.5 不同氮源对生长速度和产孢量的影响
• 3.3 致病机理研究方法
• 3.3.1 致病性测定
• 3.3.2 致病机理研究方法
• 3.4 结果分析
• 3.4.1 生物学特性测定结果
• 3.4.2 致病性测定结果
• 3.4.3 致病机理测定结果
• 3.5 本章小结
• 结论与讨论
• 参考文献
• 附录
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢