绵羊高繁殖力候选基因GnRHR的SNPs及其与繁殖力关联的研究

论文摘要

本研究利用PCR-SSCP技术检测了小尾寒羊、湖羊、南非肉用美利奴、中国美利奴绵羊和考力代等多个绵羊品种的促性腺激素释放激素受体（The gonadotropinreleasing hormone receptor GnRHR）基因,根据绵羊产羔数多少将小尾寒羊和湖羊划归为高繁殖力绵羊品种,其他为低繁殖力绵羊品种;根据绵羊GnRHR基因全序列设计8对引物覆盖全部的外显子,采用PCR-SSCP方法检测GnRHR基因外显子在不同繁殖力绵羊品种中的SNPs,同时GnRHR基因对小尾寒羊高繁殖力的影响。结果表明:引物4和引物7分别扩增GnRHR基因的外显子1和外显子2显现出多态性,其余6对引物的扩增片段都不存在多态性。引物P4在湖羊中检测到AA和BB2种基因型,而在其余4个绵羊品种中只检测到AA基因型;分析BB型与AA型的序列表明,外显子1有5个突变位点（+692G→A、+706T→A、+747T→C、+748A→T和+802T→A）,并引起氨基酸Gly→Ser、Asp→Glu和Leu→Pro的改变,湖羊中等位基因A和B的频率分别为0.74和0.26。引物P7在小尾寒羊和湖羊中都检测到CC和DD2种基因型,在南非肉用美利奴、考力代和中国美利奴绵羊3个低繁殖力的绵羊品种中均只检测到CC基因型;分析DD型与CC型的序列显示,外显子2有+50A→G和+101A→C两个突变,并引起氨基酸Glu→Gly和Gln→Pro的改变;小尾寒羊CC和DD基因型频率分别为0.87和0.13,湖羊中等位基因C和D的频率分别为0.79和0.21。分析不同基因型与产羔数之间的关联性表明,DD突变小尾寒羊平均产羔数比CC野生型多0.81只（P＜0.01）。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 英文缩略表
• 文献综述
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 实验样本
• 2.1.2 菌株和载体
• 2.1.3 药品与酶
• 2.1.4 主要仪器设备
• 2.1.5 分析工具软件
• 2.1.6 溶液试剂配置
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 羊血液DNA的提取
• 2.2.2 DNA浓度和纯度的检测
• 2.3 PCR-SSCP
• 2.3.1 引物设计与PCR扩增
• 2.3.2 SSCP分析
• 2.3.3 PCR产物直接测序
• 2.3.4 PCR结果的电泳
• 2.4 克隆和测序
• 2.4.1 PCR产物的纯化
• 2.4.2 感受态细胞的制备---氯化钙法
• 2.4.3 连接反应
• 2.4.4 转化
• 2.4.5 质粒DNA的小量提取——试剂盒法
• 2.4.6 重组质粒的鉴定
• 2.5 数据分析
• 2.5.1 基因型频率和等位基因频率
• 2.5.2 数据统计分析
• 3 结果与分析
• 3.1 DNA提取
• 3.2 GnRHR基因PCR-SSCP分析
• 3.2.1 PCR扩增结果
• 3.2.2 PCR-SSCP检测
• 3.2.3 基因型判定与序列分析
• 3.3 基因型频率和基因频率
• 3.4 不同基因型小尾寒羊的产羔数比较
• 4 讨论
• 4.1 实验材料的选择
• 4.2 影响PCR扩增反应的因素
• 4.2.1 模板质量
• 4.2.2 引物设计
• 4.2.3 PCR反应的温度
• 4.3 PCR-SSCP方法检测的影响因素
• 4.3.1 影响单链构象形成的因素
• 4.3.2 影响SSCP显示的因素
• 4.4 SSCP的结果分析
• 4.5 GnRHR基因的多态性及其与繁殖力的关系
• 4.5.1 绵羊GnRHR基因的多态性
• 4.5.2 GnRHR基因与繁殖性能的关系
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介和发表论文情况
• 附录A
• 附录B