葡磷酰胺临床前药物代谢与动力学研究

论文摘要

背景：葡磷酰胺（glufosfamide），化学名为β-D-吡喃葡萄糖基-N，N′-二（2-氯乙基）磷酰胺，英文名为β-D-Glucopyranosyl-[N，N′-bis[（2-chloroethyl）] phosphoric acid diamide，为一种新型的烷化剂类抗肿瘤药物，是由一分子具有直接烷化作用的异磷酰胺氮芥与一分子葡萄糖通过糖苷键相连而形成的。葡磷酰胺在钠依赖性的葡萄糖跨膜转运蛋白SAAT1的作用下转运进入肿瘤细胞，然后通过水解释放异磷酰胺氮芥而发挥活性，具有抗乳腺癌、结肠癌、非小细胞肺癌和胰腺癌的活性。目前在国内正处于临床前开发阶段。 目的：研究葡磷酰胺在动物体内的动力学及分布情况，考察葡磷酰胺在正常和荷瘤裸小鼠体内组织分布情况的差异，及葡磷酰胺对大鼠肝微粒体中主要Ⅰ相代谢酶的影响，从而更准确地预测葡磷酰胺在人体内的变化过程，更合理地评价葡磷酰胺的有效性和毒性，为一期临床研究提供可靠的科学依据。 方法：采用液相色谱-离子阱质谱联用（LC／MSn）法考察葡磷酰胺在具有不同温度和pH的磷酸盐缓冲液中的稳定性，及其在生物样品中的稳定性，通过β-葡萄糖苷酶的动力学实验、β-葡萄糖醛酸苷酶的水解和抑制实验确定造成葡磷酰胺降解的主要原因；采用液相色谱．串联质谱（LC／MS／MS）法测定葡磷酰胺分别以三个不同剂量静脉注射给药后大鼠和犬血浆中的药物浓度。由于血浆药物浓度的变化范围较大而分别采用两种样品处理方法和两个线性范围：0.005～1.0μg／mL和1.0-50μg／mL。通过生物样品（血浆、组织和排泄物）测试，考察葡磷酰胺在动物体内的动力学、组织分布、代谢及排泄过程。建立荷瘤裸小鼠的肿瘤模型（乳腺癌和结肠癌），考察葡磷酰胺在正常和荷瘤裸小鼠体内组织分布情况的差异。连续给药后制备大鼠肝微粒体，考察葡磷酰胺对大鼠肝微粒体中主要Ⅰ相代谢酶的影响。 结果：葡磷酰胺的稳定性具有pH依赖和温度依赖性，其在中性条件下比较稳定，当pH大于9或小于3时即发生快速降解，且降解速率随着温度的升高而加快。葡磷酰胺在大多数的生物样品中较稳定，只在部分样品如小肠、胰腺和尿样等中发生了不同程度的降解，降解半衰期分别为1.1、14.4和15.1h。其中尿样中药物的降解半衰期与pH9.0（12.2h）缓冲液中的相当，由此确定葡磷酰胺的降

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略语说明
• 第一章 绪论
• 1.1 前体药物设计在抗肿瘤药物开发中的意义
• 1.2 氮芥类烷化剂的药代动力学研究概况
• 1.3 研究目的及实验方案
• 第二章 葡磷酰胺在生物样品中的体外稳定性
• 2.1 定量分析方法的建立
• 2.1.1 葡磷酰胺和异磷酰胺氮芥的定量分析
• 2.1.2 葡萄糖苷酶活性测定实验
• 2.2 葡磷酰胺在不同pH磷酸盐缓冲液中的稳定性
• 2.3 葡磷酰胺在不同温度下磷酸盐缓冲液中的稳定性
• 2.4 葡磷酰胺在不同生物样品中的稳定性
• 2.5 讨论
• 2.5.1 葡磷酰胺的稳定性
• 2.5.2 生物样品采集和保存条件的选择
• 第三章 葡磷酰胺在大鼠和犬体内的药物动力学研究
• 3.1 试验设计
• 3.1.1 实验动物
• 3.1.2 给药方案
• 3.1.3 数据处理
• 3.2 定量分析方法的建立
• 3.2.1 仪器
• 3.2.2 分析条件
• 3.2.3 血浆样品处理
• 3.2.4 分析方法确证
• 3.2.5 讨论
• 3.3 药动学实验结果
• 3.3.1 大鼠体内药动学实验结果
• 3.3.2 犬体内药动学实验结果
• 3.4 讨论
• 第四章 葡磷酰胺的组织分布研究
• 4.1 葡磷酰胺在大鼠体内的组织分布研究
• 4.1.1 实验动物
• 4.1.2 给药与样品采集
• 4.1.3 定量分析方法的建立
• 4.1.4 实验结果
• 4.1.5 讨论
• 4.2 葡磷酰胺在荷瘤裸鼠体内的组织分布研究
• 4.2.1 实验设计
• 4.2.2 实验结果
• 4.2.3 讨论
• 4.3 小结
• 第五章 葡磷酰胺在大鼠体内的代谢与排泄研究
• 5.1 葡磷酰胺在大鼠体内的排泄研究
• 5.1.1 实验动物
• 5.1.2 给药与样品采集
• 5.1.3 排泄实验结果
• 5.2 葡磷酰胺在大鼠体内的代谢研究
• 5.2.1 分析方法
• 5.2.2 代谢产物的结构鉴定
• 5.2.3 讨论
• 5.3 葡磷酰胺对大鼠肝微粒体中CYP450酶的作用
• 5.3.1 大鼠肝微粒体的制备
• 5.3.2 CYP450含量的测定
• 第六章 实验部分
• 6.1 药品与试剂
• 6.2 仪器与设备
• 6.3 溶液配制
• 6.3.1 药动学实验所需溶液的配制
• 6.3.2 体外稳定性实验所需溶液的配制
• 6.3.3 蛋白浓度测定所需溶液的配制
• 6.3.4 肝微粒体孵化实验所需溶液的配制
• 6.4 葡磷酰胺的药动学研究数据
• 6.4.1 方法确证数据
• 6.4.2 血浆药物浓度数据及药动学参数
• 6.5 葡磷酰胺的体外稳定性研究
• 6.5.1 实验动物
• 6.5.2 生物样品采集
• 6.5.3 葡磷酰胺在不同条件下的稳定性
• 6.5.4 β-葡萄糖苷酶活性的测定
• 6.5.5 酶动力学实验
• 6.5.6 葡磷酰胺稳定性试验数据
• 6.6 组织分布实验
• 6.6.1 葡磷酰胺在大鼠体内的组织分布实验数据
• 6.6.2 葡磷酰胺在裸小鼠体内的组织分布
• 6.7 排泄实验
• 6.7.1 定量分析方法
• 6.7.2 实验结果
• 6.8 肝微粒体体外孵化试验
• 6.8.1 肝微粒体制备
• 6.8.2 肝微粒体蛋白浓度及 CYP450含量测定
• 6.8.3 CYP450活性测定
• 第七章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简历