刺葡萄（Vitis davidii Fo（？）x）原生质体培养及体细胞融合技术体系的研究

论文摘要

刺葡萄Vitis davidii（Roman.）Fo（?）x．为葡萄科葡萄属东亚种群的一种种质资源，分布于陕西、甘肃南部、云贵高原和长江流域，常生长在1500m以下的谷地、沟边或林缘。植株强健，枝粗叶大，枝上密布直立或稍弯皮刺；穗长（20cm以上），果大（15mm以上），晚熟，果皮较厚，风味稍淡，产量高，病虫害少，对白腐病、炭疽病和黑痘病抗性较强，但对霜霉病抗性较差。有少量鲜食栽培，江西省从刺葡萄中选育出了“塘尾”、湖南农业大学选育出“紫秋”等优良栽培品种。刺葡萄极耐阴湿，扦插不易成活，多以华东葡萄为砧木嫁接繁殖，是抗湿热和抗病育种的重要种质资源。本文以刺葡萄为试材，对其愈伤组织的诱导、离体培养、原生质体分离、原生质体培养、原生质体再生植株进行了研究；以刺葡萄和玫瑰香为试材，对葡萄原生质体电融合技术体系进行了比较系统的研究，旨在运用生物技术为刺葡萄的快速繁殖、抗性育种等方面的科学研究提供理论依据和操作技术。研究结果如下： 1．刺葡萄愈伤组织的诱导和离体培养研究 本研究以刺葡萄的叶片、卷须、茎段、幼果、果柄为试材，以1／2MS和B5为基本培养基，通过不同浓度的生长TI调节剂配比，探讨了刺葡萄愈伤组织的诱导率及继代培养情况；以刺葡萄愈伤组织为材料，在B5培养基上附加不同的生长TI调节剂种类及浓度配比，探讨了刺葡萄芽的诱导、增殖和生根。结果表明：1／2MS和B5都是适合刺葡萄愈伤组织诱导的基本培养基；诱导材料以茎段对剖的诱导率最高，以B5+2,4-D3mg·L-1+6-BA0.01mg·L-1的效果最好，愈伤组织诱导率可达100％，且愈伤组织的质量高；继代培养以B5+2,4-D0.5mg·L-1+6-BA0.2mg·L-1为培养基，4周继代一次，愈伤组织的密度适中，生长速度较快，褐变率低，仅为15％。刺葡萄愈伤组织的分化率很低，仅在B5+ZT 0.5mg·L-1+NAA0.1mg·L-1和B5+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.02mg·L-1两种培养基上培养有少量胚状体产生，胚状体分化成苗的能力弱，分化率最高为13.3％，增殖培养以B5+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.05mg·L-1培养基为佳，4周可增殖6.4倍；生根培养以B5+IBA1.0mg·L-1+NAA0.01mg·L-1培养基为好，4周平均生2.1条，根粗达2.4mm。

论文目录

• 第一章 文献综述
• 1 立题依据
• 2 我国野生葡萄资源研究进展
• 2.1 抗病性研究
• 2.2 抗寒性研究
• 2.3 抗虫性研究
• 2.4 抗湿热性研究
• 2.5 我国野生葡萄种质资源的利用状况
• 3 果树原生质体技术研究进展
• 3.1 果树原生质体技术研究概况
• 3.2 果树原生质体技术的研究内容
• 3.2.1 果树原生质体的分离纯化
• 3.2.2 果树原生质体的培养及植株再生
• 3.2.3 果树原生质体融合技术
• 3.2.4 果树原生质体超低温保存
• 3.2.5 果树原生质体遗传转化
• 3.2.6 果树原生质体的诱变
• 3.3 果树原生质体技术在果树育种上的应用状况
• 3.3.1 直接筛选体细胞无性系变异
• 3.3.2 砧木品种改良
• 3.3.3 三倍体育种
• 3.3.4 超低温保存与遗传转化在育种中的应用
• 3.4 存在的不足及展望
• 4 葡萄原生质体技术研究进展
• 4.1 基因型的选择
• 4.2 原生质体分离材料的选择
• 4.3 原生质体培养和植株再生体系的探索
• 5 本项目研究的目的和意义
• 第二章 刺葡萄离体培养研究
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 不同基本培养基对愈伤组织诱导的影响
• 2.2 不同的生长调节剂配比对愈伤组织诱导的影响
• 2.3 不同的生长调节剂配比对愈伤组织继代培养的影响
• 2.4 刺葡萄愈伤组织的分化
• 2.4.1 不同的生长调节剂配比对愈伤组织分化的影响
• 2.4.2 不同的继代培养次数对愈伤组织分化的影响
• 2.5 不同的生长调节剂配比对刺葡萄芽增殖的影响
• 2.6 不同的生长调节剂配比对刺葡萄芽生根的影响
• 3 讨论
• 3.1 刺葡萄葡萄愈伤组织的诱导的材料
• 3.2 生长调节物质对刺葡萄葡萄愈伤组织诱导的影响
• 3.3 刺葡萄愈伤组织的分化
• 3.4 刺葡萄芽的增殖
• 3.5 刺葡萄芽的生根
• 第三章 刺葡萄胚性愈伤组织的诱导及胚性细胞悬浮系的建立
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 胚性愈伤组织的诱导
• 1.2.2 胚性愈伤组织的鉴定
• 1.2.3 悬浮体系的建立
• 2 结果与分析
• 2.1 不同材料对胚性愈伤组织诱导的影响
• 2.2 不同的生长调节剂配比对胚性愈伤组织诱导的影响
• 2.3 不同浓度的蔗糖对胚性愈伤组织的影响
• 2.4 胚性愈伤组织的鉴定
• 2.4.1 细胞学鉴定
• 2.4.2 形态学鉴定
• 2.5 胚性悬浮体系的建立
• 2.5.1 不同的继代培养次数对胚性悬浮系培养的影响
• 2.5.2 不同的培养物与培养基比例对胚性悬浮系的影响
• 2.5.3 悬浮细胞的生长曲线
• 3 讨论
• 3.1 诱导材料对胚性愈伤组织诱导的影响
• 3.2 生长调节物质和蔗糖对胚性愈伤组织诱导的影响
• 3.3 继代培养次数和培养密度对细胞悬浮培养的影响
• 第四章 刺葡萄原生质体的分离研究
• 1 材料和方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 试验材料的处理
• 1.2.2 酶液组合
• 1.2.3 酶解条件
• 1.2.4 原生质体的收集、纯化
• 1.2.5 原生质体产量和活力的测定
• 2 结果与分析
• 2.1 不同的材料对原生质体分离的影响
• 2.2 叶片叶龄对原生质体分离的影响
• 2.3 不同的酶液组合对原生质体分离的影响
• 2.4 不同类型愈伤组织对原生质体分离的影响
• 2.5 不同的继代培养次数对愈伤组织原生质体分离的影响
• 2.6 不同的酶解时间对愈伤组织原生质体分离的影响
• 2.7 不同的酶液渗透压对愈伤组织原生质体分离的影响
• 2.8 不同的渗透压稳定剂对刺葡萄原生质体分离的影响
• 3 讨论
• 3.1 材料对葡萄原生质体分离的影响
• 3.2 试验条件对原生质体分离的影响
• 第五章 刺葡萄原生质培养及植株再生
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 原生质体的酶解
• 1.2.2 原生质体的培养基
• 1.2.3 原生质体的培养方式
• 1.2.4 原生质体来源的愈伤组织的分化及再生植株
• 2 结果与分析
• 2.1 不同培养基种类对原生质体培养的影响
• 2.2 不同碳源对原生质体培养的影响
• 2.3 不同原生体密度对原生质体培养的影响
• 2.4 不同的培养方式对原生质体培养效果的影响
• 2.5 不同生长调节剂配比对原生质体培养的影响
• 2.6 愈伤组织的分化和植株再生
• 3 讨论
• 3.1 原生质体培养基
• 3.2 培养方式
• 3.3 培养密度
• 3.4 愈伤组织分化及植株再生
• 第六章 葡萄原生质体电融合适宜条件的研究
• 1 材料与方法
• 1.1 刺葡萄胚性愈伤组织的诱导和悬浮系的建立
• 1.2 刺葡萄原生质体的分离
• 1.3 玫瑰香葡萄叶肉原生质体的分离
• 1.4 原生质体的电融合
• 2 结果与分析
• 2.1 交流电场对原生质体排列的影响
• 2.1.1 交流电场频率对葡萄原生质体成串状况的影响
• 2.1.2 交流电场强度对葡萄原生质体成串状况的影响
• 2.2 直流电场对原生质体融合的影响
• 2.2.1 直流脉冲场强对原生质体融合的影响
• 2.2.2 直流脉冲幅宽（PW）对原生质体融合的影响
• 2.2.3 直流脉冲次数对原生质体融合的影响
• 2.3 电融合液对原生质体融合的影响
• 2.3.1 甘露醇浓度对原生质体融合的影响
• 2浓度对原生质体融合的影响'>2.3.2 CaCl₂浓度对原生质体融合的影响
• 3 讨论
• 第七章 融合体细胞的培养及检测
• 1 试验材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.1.1 培养材料
• 1.1.2 检测材料
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 融合体细胞的培养和再生
• 1.2.2 再生苗的检测
• 1.2.2.1 形态学检测
• 1.2.2.2 细胞学检测
• 1.2.2.3 分子生物学检测
• 2 结果与分析
• 2.1 融合体细胞的培养和再生
• 2.2 再生苗的形态检测
• 2.3 再生苗染色体检测
• 2.4 再生植株RAPD分析
• 3 讨论
• 全文总结论
• 缩略词表
• 参考文献
• 图版及图版说明
• 致谢
• 作者简介