和缓艾美耳球虫与早熟艾美耳球虫江苏株的分离鉴定及其生物学特性研究

论文摘要

鸡球虫病是一种由艾美耳属球虫引起的呈世界性分布的寄生虫病,给养鸡业造成巨大的经济损失。常见的鸡球虫有七种,包括柔嫩艾美耳球虫（E. tenella）、毒害艾美耳球虫（E. necatrix）、堆型艾美耳球虫（E. acervulina）、巨型艾美耳球虫（E. maxima）、布氏艾美耳球虫（E. brunetti）、和缓艾美耳球虫（E. mitis）和早熟艾美耳球虫（E. praecox）,这七种球虫在临床上多呈混合感染。本研究对江苏地区18个鸡场鸡球虫感染情况进行了流行病学调查,发现江苏省内18个鸡场内12个鸡场存在球虫感染,感染率为66.7%。经过ITS1-PCI检测,发现阳性样品多呈几种艾美耳球虫的混合感染。其中,柔嫩艾美耳球虫感染率最高,达91.7%,是江苏地区的优势虫株；堆型艾美耳球虫的感染率为33.3%；布氏艾美耳球虫为8.3%；巨型艾美耳球虫为58.3%；和缓艾美耳球虫为50.0%；毒害艾美耳球虫为50.0%；早熟艾美耳球虫为33.3%。通过对琼脂分离单球虫卵囊方法进行改进,建立了球虫单卵囊分离技术,应用该技术成功地分离出两株球虫卵囊,即和缓艾美耳球虫江苏株（E. mitis-JS）和早熟艾美耳球虫江苏株（E. praecox-JS）,并对分离到的虫株分别进行了形态学和分子生物学鉴定。结果表明E. mitis-,JS株卵囊的大小为13.8-18.2μm×12.0～16.7μm,平均大小为15.3μm×13.6μmμm.卵囊指数为1.13; E. praecoxJS卵囊的大小为18.3-22.1μm×15.1-18.9μm,平均大小为19.5μm×16.1μm,卵囊指数为1.21。提取卵囊基因组,设计特异性引物对两株卵囊进行PCR鉴定,分别成功扩增出306bp和368bp特异性片断,进一步证明所分离球虫为和缓艾美耳球虫和早熟艾美耳球虫。以不同的剂量（1000、5000、10000、100000和200000个卵囊/羽）的E. mitis-Jl和E. praecox-JS的经口感染7日龄罗曼公鸡,研究其致病性。结果表明,随着感染剂量的增加,鸡只增重减少,肠道病变逐渐加重。当感染剂量大于10000时,感染组与对照组的平均增重差异均为显著（P<0.05）。两个虫种均能引起肠绒毛断裂,上皮细胞变性、坏死等病理变化,感染剂量到达100000时,可见肝脏和脾脏明显出血。用ELISA方法测定感染鸡血清IgG和肠道IgA水平,发现感染组较对照组IgG和IgA均有增加,两种球虫均在感染剂量为5000时,引起的IgG、IgA变化最显著。随后,又对E. mitis-J和E. praecox-JS的免疫原性进行了研究。将两种球虫分别以不同的剂量（100、500、1000、5000个卵囊/羽）经口接种7日龄罗曼公鸡,14d后用100000个卵囊/羽的剂量感染所有的免疫鸡只,通过平均增重、OPG等指标研究其免疫原性。实验结果表明,E. mitis-js免疫剂量为5000时,鸡只增重率由41.1%上升为84.9%,OPG由的3.23±0.58×105下降为0.84±0.46×105；E. praecox-JS在免疫剂量为5000时,鸡只增重率由41.1%上升为82.1%,OPG由3.98±0.71×105下降为1.16±0.52x105。两种球虫均在免疫剂量为5000时达到最佳的免疫效果。

论文目录

• 目录
• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一篇 文献综述
• 第一章 鸡球虫病与鸡抗球虫免疫机制及其分离、鉴定方法
• 1 鸡球虫的分类、形态及生活史
• 2 鸡球虫病的免疫机理
• 3 鸡球虫单卵囊分离技术的研究现状
• 4 鸡球虫分类鉴定方法的研究现状
• 5 鸡球虫病的流行情况
• 参考文献
• 第二篇 试验研究
• 第二章 江苏地区艾美耳球虫感染情况的调查
• 摘要
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 第三章 和缓艾美耳球虫与早熟艾美耳球虫单卵囊分离及生物学特性观察
• 摘要
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 第四章 E. MITIS-JS与E. PRAECOX-JS的致病性
• 摘要
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 第五章 E. MITIS-JS与E. PRAECOX-JS的免疫保护性
• 摘要
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 全文总结
• 致谢