猪细小病毒-伪狂犬病重组病毒活疫苗SA215（B）的研究

论文题目: 猪细小病毒-伪狂犬病重组病毒活疫苗SA215（B）的研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 预防兽医学

作者: 石谦

导师: 郭万柱

关键词: 猪细小病毒,伪狂犬病病毒,重组,疫苗

文献来源: 四川农业大学

发表年度: 2005

论文摘要: 本研究以课题组前期构建的猪细小病毒伪狂犬病重组病毒SA215(B)株为起始材料,在系统研究重组病毒SA215(B)生物学特性的基础上,深入研究了该病毒株的制苗用种毒特性。按照国家兽用生物制品质量标准制订了重组病毒活疫苗SA215(B)的生产制造及检验规程,试制了疫苗3批,经各项指标检测均为合格,并研究确定了疫苗的保存期、免疫保护期、抗潜伏感染性能等系列生产用指标,结论认为猪细小病毒伪狂犬病重组病毒SA215(B)株为一优秀的疫苗候选株。 1.重组病毒疫苗株SA215(B)的生物学特性研究选择多种细胞研究观察重组病毒的细胞培养特性,结果表明PRV SA215(B)疫苗株在细胞培养上具有泛嗜性,能在多种组织培养细胞内增殖,但表现的敏感度不同,最敏感的细胞为Vero细胞和MDBK细胞。穿入动力学和一步生长曲线的测定结果表明,基因缺失重组对PRY SA215(B)株在培养细胞的吸附和穿入过程没有造成阻碍,与亲本株SA215株相似,在增殖病毒时,最佳收毒时间应在培养36h左右、可导致75～90%细胞出现病变。理化特性研究显示重组病毒PRV SA215(B)对热和反复冻融敏感,但有一定的抵抗力:在一定的pH值范围内(pH5～9),该病毒相对稳定,该结果表明基因缺失对病毒的理化特性影响很小。电镜扫描分析结果证实重组病毒SA215(B)株能在细胞培养上正常形念发生,能形成感染性病毒粒子,与亲本株SA215株的培养特性相同。在感染重组病毒的细胞中,同时存在两种大小不一的病毒颗粒。大的病毒颗粒具有囊膜,主要分布在细胞核外,形态大小表明其是伪狂犬病毒颗粒:而小的病毒颗粒为无核酸的空壳,不具有囊膜,其形态、数量、出现时机,推断可能是PPV的VP2基因形成的颗粒。 2.重组病毒活疫苗SA215(B)的试制及其保存期研究本次试验中按重组病毒活疫苗SA215(B)生产检验规程试制了3批疫苗,疫苗批号为04001、04002和04003,半成品和成品检验3批疫苗均为合格。保存期试验结果显示重组病毒活疫苗SA215(B)在4～8℃条件下保存期为1年。 3.重组病毒活疫苗SA215(B)免疫原性和安全性研究通过不同剂量(4倍、50倍、3倍)的重组疫苗接种新生仔猪、断奶仔猪和妊娠母猪以确

论文目录:

第一章文献综述

引言

综述一猪细小病毒病及病原学特征

1.1 流行病学概况

1.2 PPV病原学特征

1.2.1 PPV的分类学地位

1.2.2 PPV的形态及其理化特性

1.2.3 PPV的培养特性

1.2.4 PPV的分子生物学特征

1.2.5 PPV的组织嗜性与致病性

1.3 PPV诊断与防制

1.4 PPV疫苗研究进展

1.4.1 弱毒疫苗

1.4.2 灭活疫苗

1.4.3 PPV新型疫苗

综述二伪狂犬病及病原特征

2.1 伪狂犬病概述

2.2 PRV病原特征

2.3 伪狂犬病基因缺失疫苗研究进展

2.3.1 传统疫苗

2.3.2 基因缺失疫苗

2.4 伪狂犬病毒基因缺失疫苗的突出特点

2.5 发展中的疫苗

2.5.1 伪狂犬病病毒亚单位疫苗

2.5.2 伪狂犬病毒核酸疫苗

2.5.3 以伪狂犬病毒为载体的多价疫苗

4 小结

第二章猪细小病毒-伪狂犬病重组病毒疫苗株SA215(B)的生物学特性研究

1 研究目的和意义

2 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 病毒和细胞

2.1.2 试剂

2.2 方法

2.2.1 蚀斑试验

2.2.2 PRV SA215和PRV SA215(B)在不同细胞上致病变效应的观察

2.2.3 病毒在不同细胞上的增殖滴度

2.2.4 PRV SA215(B)不同接毒剂量对Vero细胞和MDBK细胞感染试验

2.2.5 穿入动力测定

2.2.6 一步生长曲线测定

2.2.7 病毒理化特性研究

2.2.8 重组病毒遗传稳定性研究

2.2.9 电镜观察

3 结果

3.1 蚀斑试验

3.2 PRV SA215和PRV SA215(B)在不同细胞上CPE的观察(见图)

3.3 病毒在不同细胞上的增殖滴度

3.4 PRV SA215(B)不同接毒剂量对Vero细胞感染试验

3.5 穿入动力测定

3.6 一步生长曲线的测定

3.7 病毒理化特性研究

3.7.1 耐热性试验

3.7.2 酸碱稳定性试验

3.7.3 冻融稳定性

3.8 重组病毒遗传稳定性研究

3.9 PRV SA215株形态发生过程

4.讨论

4.1 重组对病毒形态学影响

4.2 基因重组对病毒增殖特性的影响

4.3 重组病毒的理化学特性

4.4 病毒的最佳接种剂量的确定

4.5 关于重组病毒遗传稳定性

5 结论

第三章猪细小病毒-伪狂犬病重组病毒活疫苗SA215(B)的试制及其保存期研究

1 材料和方法

1.1 种毒和细胞

1.2 标准血清

1.3 其它试剂

1.4 试验动物

1.5 仪器设备

1.6 猪细小病毒-伪狂犬病重组病毒活疫苗SA215(B)的试制

1.6.1 鸡胚成纤维细胞的制备

1.6.2 半成品制备

1.6.3 半成品检验

1.6.4 配苗和冻干

1.6.5 成品检验

1.7 PPV-PRV重组病毒活疫苗SA215(B)保存期试验

2 结果

2.1 PPV-PRV重组病毒活疫苗SA215(B)半成品检验

2.2 PPV-PRV重组病毒活疫苗SA215(B)成品检验结果

2.3 PPV-PRV重组病毒活疫苗SA215(B)保存期试验结果

3 分析与讨论

3.1 PPV-PRV重组病毒活疫苗SA215(B)的试制

3.2 PPV-PRV重组病毒活疫苗SA215(B)的保存期

3.3 PPV-PRV重组病毒活疫苗SA215(B)的应用前景分析

4 结论

第四章 PPV-PRV重组病毒活疫苗SA215(B)免疫原性和安全性研究

1 材料

1.1 疫苗和病毒

1.2 试验动物

1.3 细胞

1.4 试剂

2 方法

2.1 细胞培养

2.2 鸡胚成纤维细胞的制备

2.3 病毒增殖

2.4 蚀斑试验

2.5 血清中和抗体的滴定

2.6 PPV-PRV SA215(B)免疫效果及最低免疫剂量的测定

2.6.1 试验猪及分组

2.6.2 确定方法

2.7 PPV-PRV重组病毒活疫苗SA215(B)免疫持续期的测定

2.7.1 PPV-PRV重组病毒SA215(B)对伪狂犬病的免疫持续期测定。

2.7.2 PPV-PRV重组病毒SA215(B)对猪细小病毒的免疫持续期测定

2.8 PPV-PRV重组病毒活疫苗SA215(B)免疫原性试验

2.8.试验动物安排

2.8.1 免疫原性测定

2.9 安全性试验

2.10 鼻分泌液中病毒含量检测试验

3 试验结果

3.1 PPV-PRV重组病毒活疫苗SA215(B)最低免疫剂量的测定

3.2 PPV-PRV重组病毒活载体疫苗SA215(B)免疫期测定

3.2.1 PPV-PRV重组病毒活疫苗SA215(B)对伪狂犬病的免疫期测定

3.2.2 PPV-PRV重组病毒活疫苗SA215(B)对PPV的免疫期测定

3.3 PPV-PRV重组病毒活疫苗SA215(B)免疫原性试验

3.4 PPV-PRV重组病毒活疫苗SA215(B)安全性试验结果

3.4.1 对新生仔猪的安全性试验结果

3.4.2 对断乳仔猪的安全性试验结果

3.4.3 对妊娠母猪的安全性试验结果

3.5.散毒检测试验

4.讨论

4.1 PPV-PRV重组病毒活疫苗SA215(B)的安全性

4.2 PPV-PRV重组病毒活疫苗SA215(B)的免疫效果

4.3 PPV-PRV重组病毒活疫苗SA215(B)的免疫期

5 结论

第五章 PPV-PRV重组活疫苗SA215(B)在体内分布及抗潜伏感染研究

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 疫苗和病毒

1.1.2 试验动物

1.1.3 细胞

1.1.4 试剂

1.2 方法

1.2.1 细胞培养

1.2.2 蚀斑试验

1.2.3 体内扩散研究

1.2.4 疫苗接种对强毒潜伏感染形成影响的研究

1.2.5 gE／gB多重鉴别PCR用于潜伏感染的诊断方法建立

2 结果

2.1 PRV Fa、PRV SA215、PRV 783、PRV SA215(B)在Vero细胞上的蚀斑试验

2.2 病毒体内分布

2.3 gE／gB多重鉴别PCR诊断方法的建立

2.4 疫苗接种对强毒潜伏感染的建立和活化的影响

2.4.1 先接种后攻毒SA215、SA215(B)、783对潜伏感染的影响。

2.4.2 疫苗接种后用地塞米松的处理对病毒活化的影响

2.4.3 先攻毒再接种SA215、SA215(B)、783对潜伏感染的影响

3 讨论

4、结论

参考文献

致谢

读博期间论文发表情况

发布时间: 2005-10-27

参考文献

[1].伪狂犬病基因缺失疫苗SA215研究[D]. 陈陆.四川农业大学2003

猪细小病毒-伪狂犬病重组病毒活疫苗SA215（B）的研究

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