论文摘要
时间分辨荧光免疫分析是一种超高灵敏度的分析方法,作为取代放射性免疫分析法的一种手段,该方法已经在临床检测、医学、生命科学的研究中得到了较广泛的应用。它利用稀土离子螯合物的荧光特性:荧光寿命长、Stokes位移大。以稀土离子螯合物为标记物标记免疫反应体系中的抗原或抗体。免疫反应发生后,进行荧光测量时,采用适当延缓测量时间和选择适合的测量波长的方法,能有效的降低本底和背景荧光的干扰,从而极大的提高检测的灵敏度。时间分辨荧光免疫分析存在两个不同的体系:解离增强体系和直接固相镧系体系。较早发展起来的解离增强体系,由于在测量荧光时,需要向体系中加入解离增强剂而得名。解离增强体系虽然具有很高的检测灵敏度,但操作繁琐。而直接固相镧系体系操作简便,在核酸定位杂交分析和免疫荧光成像领域中有着很好发展前景,受到了广泛的重视。直接固相镧系体系中使用的双功能螯合剂不仅要具有与蛋白连接、与稀土离子螯合的功能;同时,其与稀土离子形成配合物后,要能够通过分子内能量传递,向稀土离子高效的传递能量,顺利地实现荧光增强的作用,从而实现直接固相检测的目的。因此,理想的双功能螯合剂是实现直接固相镧系体系的关键。本论文叙述了两种新型固相时间分辨荧光免疫分析联吡啶型双功能螯合剂中间体4,4′-二(对硝基苯乙炔基)-6,6′-二甲基-2,2′-联吡啶,4,4′-二溴-6,6′-二(N,N′-二乙酸乙酯-N-亚甲基)-2,2′-联吡啶的合成过程,利用DSC、红外光谱、元素分析、1H-核磁共振等测试手段对各步产物进行了验证。并对各步反应合成条件进行了探索,研究了反应温度、反应时间、催化剂用量、投料比、加料方式等因素对产率的影响,改进了合成方法,提高了产率。为时间分辨荧光免疫分析双功能螯合剂的合成与发展提供了重要的中间体。
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