电针预处理对实验性癫癎大鼠认知损害的保护作用及机制研究

电针预处理对实验性癫癎大鼠认知损害的保护作用及机制研究

论文摘要

癫癎发作既可引起脑的结构损害,也可造成认知及神经心理上的损害。动物实验和临床影像学研究发现,癫癎的发作可以引起神经元的死亡。在这种病理改变的基础上,经常遭受癫癎发作的患者可出现认知功能损伤,包括反应迟钝、记忆困难、注意力缺陷等。在儿童癫癎患者,认知损害更加广泛,如:语言障碍、学习困难、学习成绩差、行为障碍、并最终导致职业技能的降低。然而,目前对癫癎造成的认知损害,仍然缺少理想的治疗方法。在祖国医学,针灸是一种千百年来用于治疗多种疾病的临床手段。它具有促进内环境稳定、改善脑血液循环、控制疼痛、调节中枢神经系统、以及抗癫癎作用。以往的实验研究发现:不论是在红藻氨酸,还是青霉素诱发的癫癎模型,电针(electro-acupunture,EA)均具有抗癫癎作用,EA穴位刺激可以改善匹罗卡品癫癎模型造成的大鼠认知损害。在对癫癎发作后神经元死亡的研究发现,调节凋亡的分子机制被激活。我们以往的研究表明,EA刺激百会和大椎穴可以抑制实验性癫癎大鼠海马神经元的凋亡。因此,我们推测,EA的预处理可以预防癫癎发作引起的认知缺损,其抑制神经元凋亡的作用参与了这一过程。- 4 -癫癎后神经元的凋亡受一系列凋亡调节因子的调控。半胱天冬酶(aspartate-specific cysteine protease,Caspase)是一种天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白酶,在细胞内以酶原的形式存在,在蛋白水解时激活为有活性的酶。半胱天冬酶级联反应可激活凋亡的执行分子(Caspase-3),从而裂解细胞内的结构蛋白、存活蛋白,激活与DNA断裂有关的酶。Bcl-2蛋白家族也参与了癫癎后神经元死亡的调节,包括抗凋亡和促凋亡两个方面。Bcl-2蛋白家族通过二聚体的形成在调节线粒体及其它细胞器的功能方面起着重要作用。在本研究中,我们运用水迷宫实验来观察S-D大鼠的空间分辨能力及EA的保护作用,运用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling,TUNEL)和4,6-二咪基-2-联苯基吲哚(4,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色观察了锂-匹罗卡品癫癎持续状态(status epilepticus,SE)模型大鼠的海马神经元凋亡,应用免疫荧光法检测海马区Caspase及Bcl-2家族相关蛋白的表达。为EA预处理通过抑制海马神经元凋亡,进而减轻癫癎对大鼠认知的损害提供了证据。本研究表明:1)SE诱发了S-D大鼠海马CA1/CA3区大量的神经元凋亡,进而造成了认知功能的损害(P<0.01,n=5)。2)EA百会及大椎穴预处理减少了海马CA1/CA3区的神经元的凋亡(P<0.05,n=5),减低了SE诱发的认识损害的程度(P<0.05,n=5)。3)EA百会及大椎穴预处理抑制了海马CA1/CA3区SE诱发的Bcl-2蛋白家族促凋亡因子Bim、Bid和Bax的表达增高(P<0.05,n=5)。4)癫癎发作后海马区的抗凋亡因子Bcl-w和Bcl-2阳性的神经元明显增多(P<0.01,n=5),而EA百会及大椎穴预处理对其表达无明显影响(P≧0.05,n=5)。5)EA阿是穴预刺激对SE诱发的神经元凋亡、认知损害的程度、及Bcl-2蛋白家族凋亡调节因子的表达无明显影响(P≧0.05,n=5)。总而言之,本研究首次证明EA百会及大椎穴预处理,具有保护实验性癫癎大鼠海马神经元的作用,进而减低癫癎发作对认知的损害。其机制可能与其抑制促凋亡因子Bim、Bid和Bax的表达有关,而癫癎后的抗凋亡因子Bcl-w和Bcl-2的表达上调可能是神经元自我保护的一种机制。本研究为预防癫癎造成的脑损伤及认知障碍提供了新的思路,为电针治疗癫癎诱发的认知损害提供了理论依据。

论文目录

  • 缩略语表
  • 中文摘要
  • ABSTRACT
  • 前言
  • 文献回顾
  • 1. 癫癎与认知障碍
  • 2. 细胞凋亡及其调控
  • 3. 癫癎与神经元凋亡
  • 4. 中医与癫癎
  • 研究内容
  • 实验一 电针预处理对癫癎大鼠认知损害的影响
  • 1 材料
  • 2 方法
  • 3 结果
  • 4 讨论
  • 实验二 电针预处理对癫癎大鼠海马神经元凋亡的影响
  • 1 材料
  • 2 方法
  • 3 结果
  • 4 讨论
  • 实验三 电针预处理对促凋亡因子BAX表达的影响
  • 1 材料
  • 2 方法
  • 3 结果
  • 4 讨论
  • 实验四 电针预处理对外在神经元凋亡途径的影响
  • 1 材料
  • 2 方法
  • 3 结果
  • 4 讨论
  • 实验五 电针预处理对内在神经元凋亡途径的影响
  • 1 材料
  • 2 方法
  • 3 结果
  • 4 讨论
  • 小结
  • 本研究的不足及未来的探索方向
  • 实验中的意外发现
  • 参考文献
  • 个人简历和研究成果
  • 致谢
  • 相关论文文献

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