论文摘要
目的:Syk是一种广泛表达在造血细胞上的非受体型蛋白酪氨酸激酶,在淋巴细胞发展及活化过程中起着极为重要的作用。近年来的研究认为,Syk在多种恶性肿瘤的发病过程中发挥了重要作用,但其作用机制尚不明确。本研究从基因和蛋白水平检测了syk在B淋巴瘤细胞中的表达,分析了syk表达水平不同的细胞对三氧化二砷的药物敏感性,以及三氧化二砷对syk表达的影响,以探讨syk表达与三氧化二砷对B淋巴瘤细胞抑瘤作用的相互关系。方法:1 B淋巴瘤细胞中syk表达的检测采用免疫细胞化学法和Western blot方法检测Raji、Ramos和Namalwa淋巴瘤细胞中Syk蛋白的表达;通过RT-PCR法半定量检测3种细胞中syk基因水平的表达。2采用MTT法分析不同浓度的三氧化二砷作用不同时间后,对Raji、Ramos和Namalwa细胞增殖反应的抑制作用,从而选择适当的药物浓度和作用时间,用于分析syk对三氧化二砷抑瘤作用的影响。3应用流式细胞术分析不同浓度三氧化二砷（1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L）作用于Raji、Ramos细胞72h后,对细胞周期的影响;并采用RT-PCR和流式细胞术从基因和蛋白水平检测syk及周期相关因子p21WAF1/CIP1表达的变化。4应用流式细胞术分析不同浓度三氧化二砷（1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L）作用于Raji、Ramos细胞72h后,对细胞凋亡的影响;并采用RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-2 mRNA表达的变化。5.采用RNAi技术,特异性沉默Raji细胞中syk的表达,采用RT-PCR及流式细胞术检测经RNAi后,三氧化二砷对Raji细胞周期相关基因p21WAF1/CIP1表达的影响。结果:1不同B淋巴瘤细胞株中,Raji和Namalwa细胞syk mRNA（514bp）表达阳性,而Ramos细胞syk mRNA（514bp）表达阴性;免疫细胞化学结果显示,Raji和Namalwa细胞胞浆呈阳性染色,Ramos细胞胞浆未着色; Western blot印迹分析结果显示,Raji和Namalwa细胞检测到特异性Syk蛋白的表达,而Ramos细胞未检测到Syk蛋白的表达。2三氧化二砷能明显抑制Raji、Namalwa和Ramos细胞的增殖,并呈浓度及时间依赖性,4μmol/L三氧化二砷处理72h时,对三种B淋巴瘤细胞的抑瘤率分别达到（78.3±3.1）%、（69.6±3.9）%和（47.6±4.6）%,其中对Raji细胞的增殖抑制作用更明显（P<0.01）。3三氧化二砷作用Raji、Ramos细胞72h时,G0/G1期细胞明显增加,S和G2/M期细胞数明显减少,与对照组相比,差异有显著性（P<0.01）;经三氧化二砷处理的Raji细胞中Syk、P21蛋白表达上调,与对照组相比均有显著性差异（P<0.01）; syk、p21WAF1/CIP1mRNA的表达也明显增强,与对照组相比明显增高,均有显著性差异（P<0.01）。而经三氧化二砷处理后,Ramos细胞syk、p21WAF1/CIP1 mRNA仍呈阴性表达。4三氧化二砷可显著增加Raji和Ramos细胞的凋亡率,不同浓度三氧化二砷作用72h的细胞凋亡率与对照组相比均有显著性差异（P<0.01）。经三氧化二砷处理后,Ramos细胞的bcl-2 mRNA表达受抑,与对照组相比有显著性差异（P<0.01）,而Raji细胞bcl-2 mRNA的表达与对照组相比无显著性差异（P>0.05）。5 RNAi技术可有效沉默Raji细胞中syk mRNA和蛋白的表达。syk表达被RNAi沉默后,不同浓度三氧化二砷处理对Raji细胞p21 mRNA和蛋白的表达影响不明显,与对照组相比差异无显著性（P>0.05）。结论:1 Raji和Namalwa细胞syk在基因和蛋白水平均表达阳性,Ramos细胞syk基因和蛋白水平均表达阴性。2三氧化二砷可明显抑制Raji、Namalwa和Ramos细胞的增殖,对syk表达阳性的Raji细胞作用更显著。3三氧化二砷可使Raji、Ramos细胞发生G0/G1期阻滞,并可上调Raji细胞中syk和p21WAF1/CIP1的表达,但对Ramos细胞syk和p21WAF1/CIP1的表达无影响。提示三氧化二砷诱导Raji细胞周期阻滞可能与上调p21WAF1/CIP1的表达有关。4三氧化二砷可诱导Raji和Ramos细胞凋亡,并下调Ramos细胞bcl-2 mRNA的表达,但不影响Raji细胞bcl-2 mRNA的表达,提示三氧化二砷诱导Ramos细胞发生凋亡可能与下调bcl-2的表达有关。5阻滞细胞周期发展和诱导细胞凋亡可能是三氧化二砷体外抗肿瘤的作用机制之一,三氧化二砷诱导Raji细胞p21WAF1/CIP1表达上调可能与syk的表达上调有关。
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- [1].三氧化二砷之浅谈[J]. 知识窗(教师版) 2016(04)
- [2].三氧化二砷治疗老年急性髓系白血病的临床疗效评估[J]. 临床医药文献电子杂志 2017(76)
- [3].三氧化二砷在急性早幼粒细胞性白血病治疗中的临床效果探讨[J]. 世界最新医学信息文摘 2018(67)
- [4].三氧化二砷治疗初发急性早幼粒细胞白血病84例临床观察[J]. 医学信息(中旬刊) 2011(08)
- [5].冷原子吸收光谱法测定三氧化二砷中汞[J]. 理化检验(化学分册) 2009(01)
- [6].急性早幼粒细胞白血病给予三氧化二砷联合化疗治疗的临床观察[J]. 世界最新医学信息文摘 2018(02)
- [7].来那度胺、三氧化二砷及维生素C治疗复发/难治性多发性骨髓瘤的疗效分析[J]. 中国现代医生 2018(02)
- [8].原子吸收分光光度法测定牛黄解毒片中的三氧化二砷含量[J]. 中国药品标准 2013(01)
- [9].三氧化二砷脂质体透过载瘤大鼠血脑屏障的实验研究[J]. 现代生物医学进展 2008(10)
- [10].三氧化二砷与组蛋白修饰模式的作用研究进展[J]. 胃肠病学和肝病学杂志 2018(03)
- [11].三氧化二砷在肿瘤治疗中的应用[J]. 中国医疗前沿 2013(07)
- [12].三氧化二砷对肺癌作用的研究进展[J]. 临床肺科杂志 2010(06)
- [13].三氧化二砷辅助治疗难治或复发急髓白血病的疗效观察[J]. 现代肿瘤医学 2015(10)
- [14].三氧化二砷治疗肝癌的疗效分析[J]. 中国药物经济学 2014(02)
- [15].三氧化二砷治疗急性早幼粒细胞白血病的疗效观察[J]. 河南医学研究 2014(04)
- [16].三氧化二砷治疗复发性急性早幼粒细胞白血病的疗效分析[J]. 中国医药指南 2013(22)
- [17].三氧化二砷与实体肿瘤的治疗[J]. 江苏医药 2011(08)
- [18].三氧化二砷冶炼废渣的危害及处理[J]. 环境工程 2009(02)
- [19].三氧化二砷联合沙利度胺治疗骨髓增生异常综合征[J]. 中国现代医学杂志 2009(22)
- [20].司坦唑醇联合三氧化二砷治疗骨髓增生异常综合征38例[J]. 郑州大学学报(医学版) 2008(05)
- [21].三氧化二砷治疗骨髓增生异常综合征疗效观察[J]. 现代医药卫生 2008(21)
- [22].三氧化二砷注射液治疗急性早幼粒细胞白血病的效果研究[J]. 当代医学 2020(03)
- [23].三氧化二砷联合维生素C为主化疗方案治疗老年复发/难治性多发性骨髓瘤33例[J]. 医药导报 2019(10)
- [24].三氧化二砷在消化系恶性肿瘤治疗中的重要性分析[J]. 世界最新医学信息文摘 2018(54)
- [25].三氧化二砷治疗肿瘤临床应用进展[J]. 陕西医学杂志 2015(06)
- [26].全反式维甲酸、三氧化二砷双诱导联合化疗治疗急性早幼粒细胞性白血病的疗效分析[J]. 实用诊断与治疗杂志 2008(05)
- [27].应用三氧化二砷治疗白血病患者尿中砷水平的变化及其与不良反应的关系[J]. 中国全科医学 2011(31)
- [28].三氧化二砷在恶性血液肿瘤的实验研究进展[J]. 江西医药 2009(01)
- [29].三氧化二砷的抗肝癌作用研究[J]. 长春中医药大学学报 2008(03)
- [30].三氧化二砷与阿糖胞苷联合治疗骨髓增生异常综合征17例疗效观察[J]. 中国卫生标准管理 2017(04)