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阿糖胞苷诱导白血病HL60细胞凋亡及其对bcl-2表达的影响

2020-11-21阅读(596)

阿糖胞苷诱导白血病HL60细胞凋亡及其对bcl-2表达的影响

论文摘要

阿糖胞苷（Ara-C）是治疗急性白血病首选的和非常有效的化疗药物之一。不同剂量Ara-C治疗白血病的作用及其机制不完全相同,不同剂量Ara-C组成不同的治疗方案,丰富了急性白血病治疗的内涵,取得了令人振奋的治疗效果。Ara-C临床使用剂量相差数十倍,甚至数百倍,其临床用量分别为小剂量Ara-C20mg/m2/d,常规剂量100-150mg/m2/d,中剂量0.5-1.0g/m2/d,大剂量1.0-3.0g/m2/次,每日二次。小剂量Ara-C是近3-5年国内外用于诱导治疗难治性白血病或常规治疗无效的急性白血病及缓解后的巩固治疗。大剂量Ara-C用于对急性淋巴细胞和急非淋白血病缓解后的早期强化治疗及急非淋白血病的强化治疗。但国内外关于小剂量及大剂量Ara-C治疗白血病的机制研究报道较少,本文按limber公式:μg/ml=（60×D/5000）×2×103计算小剂量、常规剂量和大剂量Ara-C血药浓度分别为20、120和1500μg/ml,并以此作为实验浓度研究不同剂量Ara-C对HL60细胞凋亡的诱导作用及其对bcl-2表达的影响。并初步探讨了小剂量Ara-C与重组人粒细胞集落刺激因子（G-CSF）联合应用对HL60细胞凋亡的影响。 小剂量（20μg/ml）和常规剂量（120μg/ml）Ara-C分别对HL60细胞作用24、48和72h和大剂量（1500μg/ml）Ara-C分别对HL60细胞作用6、12和24h后,倒置相差显微镜下和经HE染色后在普通光学显微镜下观察HL60细胞的形态学变化。结果表明,加药组细胞皱缩、体积缩小,形态不规则,而对照组细胞形态规则,大小均一。为进一步观察Ara-C对细胞超微结构的变化,我们采用了透射电子显微镜观察,结果表明,经Ara-C处理的HL60细胞在电镜下可见,凋亡细胞核染色质呈高度浓缩,边移,沿核膜内侧分布,呈新月形,有凋亡小体产生。而对照组细胞则无上述现象,细胞核完整,核染色质分布均匀。 小剂量（20μg/ml）和常规剂量（120μg/ml）Ara-C分别对HL60细胞作用24、48和72h和大剂量（1500μg/ml）Ara-C分别对HL60细胞作用6、12和24h,通过Annexin V-FITC和PI双标记及其结合流式细胞仪分析,结果表明细胞凋亡百分率随药物浓度的增加和作用时间的延长而增加,呈浓度-时间-依赖性,与对照组相比较,P<0.01。通过PI单染和流式细胞仪分析细胞周期的变化,结果表明细胞停滞于G0/G1期,S期细胞随药物浓度和作用时间的增加而逐渐减少。DNA琼脂糖凝胶电泳结果亦表明凋亡细胞DNA发生了明显的降解,形成典型的DNA梯带。

论文目录

  • 中文摘要
  • Abstract
  • 序言
  • 第一部分：文献综述
  • 1.白血病的发病机制
  • 2.Ara-C治疗急性白血病的主要机理
  • 2.1 Ara-C通过抑制DNA聚合酶和干扰DNA合成起作用
  • 2.2 Ara-C与细胞周期的关系
  • 2.3 Ara-C的诱导分化作用
  • 2.4 Ara-C通过Caspase家族成员介导细胞凋亡
  • 3.Ara-C的毒性反应
  • 4.细胞凋亡与白血病的研究现状
  • 4.1 细胞凋亡与细胞坏死的研究
  • 4.2 细胞凋亡主要相关基因及其在白血病发病中的作用
  • 5.造血细胞生长因子的调节作用
  • 6.Ara-C诱导细胞凋亡和对bcl-2表达的研究意义
  • 第二部分：不同剂量Ara-C对HL60细胞凋亡的影响
  • 1.材料
  • 2.实验方法
  • 2.1 RPMI-1640细胞培养液的配制
  • 2.2 细胞培养
  • 2.3 细胞形态学的初步观察
  • 2.4 HL60细胞生长曲线的绘制
  • 2.5 MTT法分析Ara-C对HL60细胞的生长抑制作用
  • 2.6 HE染色观察Ara-C对HL60细胞形态学变化的影响
  • 2.7 应用透射电镜观察HL60细胞的超微结构变化
  • 2.8 应用流式细胞仪分析细胞周期时相分布
  • 2.9 流式细胞仪分析Ara-C对HL60细胞凋亡的影响
  • 2.10 DNA琼脂糖凝胶电泳
  • 2.11 统计学处理
  • 3.结果与分析
  • 3.1 倒置显微镜下的细胞形态学观察
  • 3.2 HL60细胞生长曲线的绘制
  • 3.3 不同剂量Ara-C对HL60细胞的生长抑制作用
  • 3.4 HE染色观察细胞的形态学变化
  • 3.5 透射电镜观察HL60细胞超微结构的变化
  • 3.6 不同剂量Ara-C对HL60细胞周期时相分布的影响
  • 3.7 流式细胞仪分析Ara-C对HL60细胞凋亡的影响
  • 3.8 DNA琼脂糖凝胶电泳分析结果
  • 第三部分：Ara-C与G-CSF联合应用对HL60细胞凋亡的影响
  • 1.材料
  • 2.实验方法
  • 2.1 实验分组:
  • 2.2 Ara-C与G-CSF联合应用对HL60细胞生长抑制作用
  • 2.3 Ara-C与G-CSF联合应用对HL60细胞凋亡的影响
  • 2.4 统计学处理
  • 3.结果与分析
  • 3.1 Ara-C与G-CSF联合应用对HL60细胞的生长抑制作用
  • 3.2 Ara-C与G-CSF联合应用对HL60细胞凋亡的影响
  • 第四部分：不同剂量Ara-C对HL60细胞bcl-2表达的影响
  • 1.材料
  • 2.实验方法
  • 2.1 应用免疫组化染色及结合MIVNT显微图像分析系统研究Ara-C对HL60细胞Bcl-2蛋白表达的影响
  • 2.2 应用流式细胞仪及结合免疫荧光标记法分析Ara-C对HL60细胞Bcl-2蛋白表达水平的变化
  • 2.3 应用逆转录及聚合酶链式反应（RT-PCR）技术研究Ara-C对HL60细胞bcl-2 mRNA表达水平的影响
  • 2.4 统计学处理
  • 3.结果与分析
  • 3.1 免疫组化ABC法分析Ara-C对Bcl-2蛋白表达的影响
  • 3.2 流式细胞仪分析Bel-2蛋白表达水平的变化
  • 3.3 Ara-C对HL60细胞bcl-2 mRNA表达水平的影响
  • 第五部分：讨论与小结
  • 1.讨论
  • 2.小结
  • 参考文献
  • 中英文缩略词表
  • 致谢

    • 相关论文文献

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