论文摘要
阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）是以渐进性记忆减退、认知障碍和人格改变为主要临床特征的中枢神经系统退行性疾病,是痴呆最常见的一种类型。随着人口老龄化,其发病率越来越高,对人类健康的危害日益突出,故而成为近年来国际上研究的一大热点。AD特征性的病理改变为大脑皮质和海马细胞外老年斑（Senile Plaue,SP）形成、细胞内神经原纤维缠结（Neurofibrillary Tangles,NFT）和神经元变性脱失。老年斑核心成分为大量纤维状β-淀粉样蛋白（beta-amyloid protein,Aβ）沉积。载脂蛋白E（apolipoprotein E,ApoE）在AD发生发展中所起的作用越来越受到关注。ApoE在脑内主要由星形胶质细胞和小胶质细胞分泌,生理情况下具有神经元修复、树突生长、维持突触可塑性的作用。其结构基因存在多态性,3种常见等位基因分别为ε2,ε3,ε4。ApoE基因的ε4表型是家族性迟发AD和散发性AD的主要危险因素,其相应的蛋白质apoE4与Aβ亲和力最强,apoE4和Aβ的结合可能促进了AD的发生。2000年郭文平等在细胞水平的研究提示apoE4可能对Aβ神经毒具有协同作用,国外转基因动物研究也有此类报道。Aβ联合apoE4海马注射证实二者关系的实验,国内外尚未见报道.AD患者重要的组织形态学改变之一是突触脱失,其程度与痴呆严重程度平行,因此被认为是痴呆患者认知功能下降的基础。突触素（synaptophysin,SYN）作为突触前终末的特异性的标记物,可用来检测突触的密度和分布。胆碱能系统损害与AD发病相关。胆碱乙酰转移酶（Choline acetyl transferase,ChAT）是中枢神经系统合成乙酰胆碱（acetylcholine,Ach）的限速酶,在胆碱能神经元胞体内合成,是胆碱能神经元的特殊标志,其分布与Ach的分布几乎平行,故常可以作为研究胆碱能神经的标志或估计Ach含量的间接指标。国内的AD动物模型大多是海马注射Aβ模拟AD的某些病理特征,在此我们首次采用海马注射Aβ与ApoE4模拟AD多方面的病理特征,并通过检测SYN及ChAT探索Aβ与ApoE4在AD发病机制中的作用及二者间是否存在协同作用。第一部分Aβ与ApoE4对大鼠海马SYN的影响目的:观察①Aβ和ApoE4对海马SYN的影响;②二者是否具有协同作用。方法:健康雄性Wistar大鼠D-半乳糖（50mg/kg/天）腹腔注射连续6周后脑立体定向仪准确定位于双侧海马,微量注射器缓慢海马注射,实验分为四组:对照组,Aβ组,apoE4组;Aβ+apoE4组。对照组海马注射生理盐水,Aβ组海马注射Aβ1-40,apoE4组海马注射apoE4,Aβ+apoE4组海马注射Aβ+apoE4。两周后取海马固定、石蜡包埋,采用连续冠状切片,免疫组化法检测CA1区SYN的表达。结果:对照组大鼠海马结构内突触素免疫反应阳性产物呈板层状分布,这些免疫反应产物呈特异性颗粒状或点状,主要位于神经毡内,而神经元胞质淡染,胶质细胞、血管和白质不被染色;apoE4组比对照组SYN光密度值下降明显（P＜0.01）;Aβ组比对照组SYN光密度值下降明显（P＜0.01）;Aβ组比apoE4组SYN光密度值下降明显（P＜0.05）;Aβ+apoE4组比对照组、apoE4组及Aβ组SYN光密度值均下降明显（P＜0.01）;Aβ与apoE4对SYN光密度值下降具有交互作用（P＜0.05）。结论:1.Aβ及apoE4均可损伤海马突触结构;Aβ对海马突触结构的损伤比apoE4严重。2.Aβ与apoE4对海马突触结构的损伤具有协同作用。第二部分Aβ与ApoE4对大鼠海马ChATmRNA的影响目的:观察①Aβ和ApoE4对ChATmRNA的影响;②二者是否具有协同作用.方法:分组及处理同第一部分,两周后取海马固定、石蜡包埋,连续冠状切片,原位杂交法检测海马ChATmRNA的表达。结果:对照组海马CA1区层次清楚,有大量的ChAT原位杂交染色阳性神经元,排列紧密,呈棕黄色,胞体较大,圆形或椭圆形,有的可见突起;apoE4组比对照组ChATmRNA PU值下降明显（P＜0.01）;Aβ组比对照组ChATmRNA PU值下降明显（P＜0.01）;Aβ组比apoE4组ChATmRNA PU值下降明显（P＜0.01）.;Aβ+apoE4组比对照组、apoE4组及Aβ组ChATmRNAPU值均下降明显（P＜0.01）;Aβ与apoE4对ChATmRNA PU值下降具有交互作用（P＜0.05）。结论:1.Aβ及apoE4均可损伤海马胆碱能系统;Aβ对海马胆碱能系统的损伤比apoE4严重。3.Aβ与apoE4对海马胆碱能系统的损伤具有协同作用。
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