导读:本文包含了细胞核分离论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:神经示踪,表观遗传,DNA甲基化,单细胞亚硫酸盐测序
细胞核分离论文文献综述
刘志祥[1]（2018）在《利用腺相关病毒标记特定环路神经元及其细胞核的分离与DNA甲基化研究》一文中研究指出大脑作为人体最为复杂、精密的器官,由数百亿个神经元构成。单个神经元通过突触结构与其他神经元连接并形成具有功能的神经网络,从而赋予动物个体意识与行为。基于组织样本投入的传统建库测序技术会掩盖神经元彼此间存在的异质性,不适用于单神经元研究,同时,不同神经元的形态、功能以及基因表达存在的差异性由表观遗传因素所决定。因此研究提出了一种对单神经元示踪标记及其细胞核分离的研究方法,并选取表观遗传的重要形式——DNA甲基化作为研究对象。在对重组腺相关病毒(rAAV)的构建工作中,本课题首先构建了表达目的核膜蛋白的腺相关病毒重组载体pAAV-CMV/hSyn-SUN1-GFP-antibody tag,分别用广谱启动子CMV和神经元特异性启动子hSyn在细胞系转染实验体外表达和鼠脑神经元活体表达表达目的核膜蛋白。构建载体被转染进HEK-293T细胞以进行验证,转染后的细胞通过荧光显微镜观察,可见荧光信号呈圆形分布、边缘更加明亮,说明目的核膜蛋白如预期实现核膜定位标记。但通过病毒鼠脑注射实验对所包装重组病毒载体进行验证,未能在脑切片上观察到荧光信号。由于可能存在因启动子差异或是实验操作因素造成阴性结果的可能,本研究也构建包装了腺相关病毒重组载体rAAV-hSyn-eGFP-NLS,并对其进行活体注射,在脑切片可观察到大量被荧光标记的神经元,成功实现对海马投射内嗅皮层神经元的逆向标记,从而排除上述可能性。在分离被标记细胞核的研究过程中,本课题通过细胞转染的方式模拟被重组病毒标记的神经元。研究过程中,首先对转染后的细胞进行匀浆处理及密度梯度离心,以分离细胞核。分离到的细胞核形态完整且杂质较少。之后通过免疫共沉淀的方式对被标记细胞核细胞核进行捕获,所捕获细胞核阳性率约为70%,捕获率在65%~85%。同时对照组阴性细胞核漂洗后的残留率仅为0.18%,因此可认为实验组中阴性细胞核已基本漂洗干净,该实验方法可已满足后续研究需求。在利用单细胞进行DNA甲基化测序建库的研究过程中,本课题参照单细胞亚硫酸盐测序(scBS-seq)的方法,先后分别以寡量细胞及单个神经元作为建库投入,成功获得DNA甲基化测序建库。所建文库经琼脂糖凝胶电泳检测,文库片段分布大小与预期相符(300 bp~500 bp),同时条带明亮,满足上机测序要求。同时对测试样本的测序结果进行生物信息学分析,发现文库测序质量较好,且组间因建库操作造成的差异较小,因此认为该方法具有较好的可重复性。针对本课题所遇到AAV载体装载容量受限的问题,本文最后还对如何现有提高AAV装载容量的研究进行论述,并提出对衣壳蛋白编码基因cap进行人工进化的改进的新思路。此外也单细胞DNA甲基化测序技术在医学检测中的应用进行论述。(本文来源于《华中农业大学》期刊2018-06-01）
沈捷,徐进,刘光欣,施季森[2]（2015）在《不同分离缓冲液对杉木根尖细胞核悬液DNA分辨率的影响》一文中研究指出为制备高纯度的杉木细胞核悬液供BD Influx TM流式细胞分选仪使用,本研究配制了6种细胞核分离缓冲液制备样品,就不同分离缓冲液对DNA分辨效果进行比较。研究结果显示,WPB buffer不能获得有效分辨的峰形,而OTTO's buffer表现为最高的分辨率,G0/G1峰的变异系数为4.61%。其余4种细胞核分离缓冲液(Arumuganathan's buffer,Galbraith's buffer,Lysis buffer LB01和Marie's nuclear isolation buffer)的变异系数在5%~8%之间(分别为5.49%,7.30%,5.12%和6.89%)。本研究分别选用了DAPI和PI对细胞核悬液进行染色发现,利用DAPI染料获得的柱状图CV值更小、分辨率更高。研究结果表明,利用Lysis buffer LB01分离缓冲液,结合DAPI染色,可以制备得高纯度的杉木根尖细胞核悬液。这一结果为杉木根尖细胞有丝分裂中期同步化和染色体分选提供实验依据。(本文来源于《分子植物育种》期刊2015年01期）
蒙庆团[3]（2014）在《人和小鼠神经元细胞核RNA的分离与制备》一文中研究指出人脑组织主要是由神经元和胶质细胞组成。神经元是神经系统基本的结构和功能单位。神经元在细胞水平和分子水平的变异与多种神经系统疾病的发生有显着关联。多项研究表明神经元细胞特异性基因表达的异常与神经精神疾病和神经退行性疾病的发生有重要联系。然而神经系统疾病的致病机制仍未十分清楚,需要人们更为深入的研究。利用人冻存脑组织获取神经元细胞特异性表达谱不仅有助于深入了解神经元特异性基因的表达情况,还对神经系统疾病的致病机制研究有巨大的推动作用。实验证明,细胞核可作为mRNA的良好来源,且不会影响总体的基因差异性表达分析。本实验将以人冻存脑组织样本和小鼠脑组织为研究对象,分离提取神经元细胞核,获取神经元细胞核RNA,并在今后的实验中利用基因表达芯片和RNA测序等方法绘制神经元特异性基因表达谱。目的：建立人和小鼠神经元细胞核RNA分离和制备技术平台。方法：1.将脑组织在细胞裂解液下研磨,制成细胞核悬液。2.采用蔗糖密度梯度离心的方法获取纯和的脑组织细胞核；3.利用荧光标记的NeuN抗体特异性的标记神经元细胞核,再通过流式细胞分选的方法分离提取神经元细胞核；4.离心收集分选后的神经元细胞核,并利用Trizol法和RNA提取试剂盒提取神经元细胞核RNA；5.利用Agilent2100bioanalyzer对细胞核RNA进行质量分析。结果：1.我们利用流式细胞分选法可以从人和小鼠脑组织中获取纯化的神经元细胞核,在整个实验流程中细胞核形态保持完整。2.成功从分选的神经元细胞核中提取细胞核RNA。3.获取了人脑不同区域神经元细胞比例数据,发现不同个体和不同脑区的神经元细胞比例不同。4.RNA2100分析结果显示,新鲜小鼠脑组织RNA的RIN值均大于7.5,而人冻存脑组织及细胞核RNA的RIN值较低,这提示RNA2100分析的评判标准不适用于细胞核RNA的质量检测。结论：1.我们成功建立了人和小鼠神经元细胞核RNA分离提取技术平台；2.目前RNA2100分析的评判标准不适用于细胞核RNA的质量检测。3.人大脑不同区域神经元细胞的比例不同。(本文来源于《中南大学》期刊2014-06-01）
王祥,殷伟,唐云雯,殷雪,于蕾[4]（2014）在《植物细胞核分离纯化的探讨》一文中研究指出扼要综述了植物细胞核的分离制备技术,阐述了实验环节的关键点,分析了制备植物细胞核存在的主要问题,并提出了解决方法。(本文来源于《科技创新与应用》期刊2014年01期）
黄雅琼,石德顺,陈旭健,李家洲,曾诗媛[5]（2013）在《胎儿成纤维细胞的培养分离方法对猪体细胞核移植胚胎发育潜力的影响》一文中研究指出研究采用不同传代的培养方法和不同方法处理及不同培养分离法探讨胎儿成纤维细胞的处理方法对猪体细胞胚胎发育潜力的影响。结果表明:(1)100%长满汇合胎儿成纤维细胞的核移植融合率高于70%～80%的胎儿成纤维细胞(P<0.05),分裂率高于血清饥饿培养的胎儿成纤维细胞(P<0.05),但囊胚率差异不显着(P>0.05);(2)猪胎儿成纤维细胞冷冻-解冻后的核移植分裂率和囊胚发育率均显着低于新鲜和4℃冷藏的细胞(P<0.05),但融合率无显着差异(P>0.05),表明猪胎儿成纤维细胞解冻后不宜直接进行核移植;(3)采用组织块法和酶消化法分离得到的胎儿成纤维细胞所构建的重构胚胎在融合率、分裂率和囊胚率方面没有显着差异(P>0.05)。表明100%长满汇合培养是较好的猪胎儿成纤维细胞培养处理方法;猪胎儿成纤维细胞解冻后不宜直接进行核移植;组织块法和酶消化法均可用于分离培养猪体细胞核移植的胎儿成纤维细胞。(本文来源于《家畜生态学报》期刊2013年06期）
杨高强[6]（2012）在《辣椒细胞核雄性不育育性相关基因分离克隆及其生物信息学分析》一文中研究指出本研究以沈阳市农业科学院辣椒育种课题组的辣椒雄性不育两用系‘AB23’为材料,采用cDNA-AFLP技术,研究辣椒细胞核雄性不育两用系可育株和不育株的花器官发育过程中基因转录组表达差异,并克隆辣椒育性相关基因,对其进行信息学分析,将得到的育性相关基因进行了RT-PCR验证。主要结果如下：1.分别以可育株群花蕾和不育株群花蕾的cDNA为模板,选用128对E+2/M+3的选择性扩增引物进行AFLP分析,得到了21·条与辣椒细胞核雄性不育育性相关的TDFs,在NCBI的公共数据库中经Blastx或Blastn在线检索,16条可以找到较高同源性的序列,在其余的5条中,4个在NCBI中无同源序列,一条功能未知。这5个TDFs可能代表与辣椒育性相关的新基因；在16个有较高同源性的序列中,可育株群花蕾特异表达的15个,不育株群花蕾特异表达的1个。2.经Blast比对,CAF01与番茄花药绒毡层特异表达并编码富含甘氨酸蛋白的基因在核苷酸序列上同源性75%；CAF11与拟南芥果胶甲酯酶有76%的同源性；CAF12与拟南芥脂质转移蛋白也有76%的同源性,上述3个基因已被证明与植物的育性建成相关,说明CAF01、CAF11、CAF12可能是与辣椒育性相关的基因；CAS30与番薯衰老相关蛋白同源性86%,该基因片段在不育株群花蕾中特异表达,说明该基因可能是导致细胞核雄性不育的相关基因；CAF26编码的产物功能未知,CAF02、 CAF09. CAF15及CAS33经BlastX和Blastn检索没有同源系列,说明可能得到了与辣椒雄配子发育相关的新基因。3.获得的16个功能差异片段,涉及分泌(CAF01)、代谢(CAF05)、转录(CAF21)、细胞程序性死亡(CAS30)、蛋白质修饰(CAF16)、胞间运输(CAF07、CAF12)、信号转导(CAF08)、细胞黏附(CAF03)等多个相关过程。4.为进一步验证cDNA-AfLP结果的可靠性,对21个特意表达的TDF进行半定量RT-PCR分析。结果显示,在AFLP中,CAF01、CAF05、CAF11、CAF21,没有表达,但在RT-PCR验证中,都出现了弱带,但其表达趋势同AFLP相一致,可能与AFLP的染色方法有关,其它基因片段的验证结果与cDNA-AFLP结果一致。RT-PCR分析结果进一步证明了利用cDNA-AfLP筛选差异基因的可靠性。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2012-05-01）
孙婷婷,宋丽娜,于淼,李长燕,杨晓明[7]（2011）在《免疫共沉淀联合质谱对肝细胞核因子3β蛋白复合体的分离鉴定》一文中研究指出目的:利用免疫共沉淀联合质谱分析方法,在人肝癌细胞系细胞株HepG2内筛选与肝细胞核因子(HNF)3β相互作用的蛋白质。方法:通过免疫共沉淀,用特异抗体分离出HNF3β蛋白复合体,质谱鉴定其成分,NCBI数据库检索各个蛋白质的功能,分析筛选与HNF3β相互作用的蛋白质。结果:利用免疫共沉淀联合质谱分析筛选到32个与HNF3β相互作用的候选蛋白质,数据库检索发现LMNA与HNF3β具有相同功能注释,参与转录调控。结论:在细胞内HNF3β与多种蛋白质有相互作用,协同参与转录调控,推测HNF3β/LMNA之间相互作用的变化与葡萄糖及脂肪代谢及相关疾病的发生有关。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2011年05期）
李彩琴,王泽槐,徐咏珊,张劲霭,李建国[8]（2011）在《流式细胞术细胞核分离缓冲液的改良及大、小果型荔枝幼果和果皮细胞分裂活性比较》一文中研究指出以荔枝幼果为材料,比较5种常用细胞核分离缓冲液对制备样品DNA分辨率效果的影响,发现在Otto缓冲液基础上进行适当改进(增加还原剂种类和含量,把RNaseA直接加入缓冲液,降低离心力),可获得最佳的提取效果,分辨率高,细胞G1/G0峰产生的变异系数低。通过比较具有相似遗传背景的‘妃子笑’早花大果和晚花小果以及具有不同遗传背景的大果(‘四两果’)和小果(‘陈紫’)型荔枝品种之间果实发育前期的幼果和果皮的细胞分裂活性发现,大果的细胞分裂活性高于小果,且持续时间长,说明果实大小差异与果实发育前期细胞分裂活性有关。(本文来源于《园艺学报》期刊2011年09期）
徐小燕,杨雪,夏蒲,邢亚楠,关一夫[9]（2010）在《一种细胞核质蛋白分离方法的建立》一文中研究指出目的拟建立一种方便快捷、经济有效的细胞核质蛋白分离方法。方法利用自建方法、Ambion和Thermo公司的试剂盒分别提取细胞核蛋白和质蛋白,利用Western blot检测Bag-1、ING5和parafibromin蛋白亚细胞定位,通过选择不同的内参蛋白标记细胞组分蛋白的污染。结果自建核质蛋白提取方法与试剂盒相比,在操作时间和分离效果上无显着差别。发现大小不同Bag-1蛋白在胃癌细胞质和核中定位不同,ING5和parafibromin蛋白分别定位在胃癌和肺癌细胞系的细胞核中。结论自建方法可用于实验室常规细胞核质蛋白分离,具有操作简单、方便快捷和经济有效的特点,对后续蛋白组学研究有重要作用。(本文来源于《中国医科大学学报》期刊2010年10期）
薄秀梅[10]（2010）在《丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶3与细胞核分离基因C相互作用的研究》一文中研究指出目的验证丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶3(mitogen-activated protein kinase kinase ki-nase3,MAPK/ERK kinase kinase3,MEKK3)与细胞核分离基因C(Nuclear distribution gene C,NudC)的表达产物NudC相互作用的真实性,以及探讨MEKK3是否为NudC的一个上游调控激酶。方法构建了一系列的载体,通过GST-Pull down技术,免疫共沉淀技术,从体外和体内两个方面来验证MEKK3和NudC之间能否相互作用,又利用体外模拟磷酸化实验来证明MEKK3是否为NudC的一个上游调控激酶。结果GST-Pull down以及免疫共沉淀技术显示MEKK3和NudC在体内和体外均能够相互结合,体外模拟磷酸化实验表明在体外野生型MEKK3可以磷酸化NudC,而激酶失活型MEKK3不能。结论MEKK3和NudC之间能够相互作用,而且MEKK3可能为NudC的一个上游调控激酶。(本文来源于《齐齐哈尔医学院学报》期刊2010年04期）
细胞核分离论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为制备高纯度的杉木细胞核悬液供BD Influx TM流式细胞分选仪使用,本研究配制了6种细胞核分离缓冲液制备样品,就不同分离缓冲液对DNA分辨效果进行比较。研究结果显示,WPB buffer不能获得有效分辨的峰形,而OTTO's buffer表现为最高的分辨率,G0/G1峰的变异系数为4.61%。其余4种细胞核分离缓冲液(Arumuganathan's buffer,Galbraith's buffer,Lysis buffer LB01和Marie's nuclear isolation buffer)的变异系数在5%~8%之间(分别为5.49%,7.30%,5.12%和6.89%)。本研究分别选用了DAPI和PI对细胞核悬液进行染色发现,利用DAPI染料获得的柱状图CV值更小、分辨率更高。研究结果表明,利用Lysis buffer LB01分离缓冲液,结合DAPI染色,可以制备得高纯度的杉木根尖细胞核悬液。这一结果为杉木根尖细胞有丝分裂中期同步化和染色体分选提供实验依据。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
细胞核分离论文参考文献
[1].刘志祥.利用腺相关病毒标记特定环路神经元及其细胞核的分离与DNA甲基化研究[D].华中农业大学.2018
[2].沈捷,徐进,刘光欣,施季森.不同分离缓冲液对杉木根尖细胞核悬液DNA分辨率的影响[J].分子植物育种.2015
[3].蒙庆团.人和小鼠神经元细胞核RNA的分离与制备[D].中南大学.2014
[4].王祥,殷伟,唐云雯,殷雪,于蕾.植物细胞核分离纯化的探讨[J].科技创新与应用.2014
[5].黄雅琼,石德顺,陈旭健,李家洲,曾诗媛.胎儿成纤维细胞的培养分离方法对猪体细胞核移植胚胎发育潜力的影响[J].家畜生态学报.2013
[6].杨高强.辣椒细胞核雄性不育育性相关基因分离克隆及其生物信息学分析[D].内蒙古农业大学.2012
[7].孙婷婷,宋丽娜,于淼,李长燕,杨晓明.免疫共沉淀联合质谱对肝细胞核因子3β蛋白复合体的分离鉴定[J].生物技术通讯.2011
[8].李彩琴,王泽槐,徐咏珊,张劲霭,李建国.流式细胞术细胞核分离缓冲液的改良及大、小果型荔枝幼果和果皮细胞分裂活性比较[J].园艺学报.2011
[9].徐小燕,杨雪,夏蒲,邢亚楠,关一夫.一种细胞核质蛋白分离方法的建立[J].中国医科大学学报.2010
[10].薄秀梅.丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶3与细胞核分离基因C相互作用的研究[J].齐齐哈尔医学院学报.2010