维生素A对树突状细胞的调节及其在粘膜免疫中的作用

论文摘要

目的和意义：一、通过体外培养研究全反式视黄酸对脐血树突状细胞的分化、成熟及功能的影响，并通过采用视黄酸受体α的特异性拮抗剂Ro 41-5253，探讨其作用的途径，以期从抗原递呈细胞这一免疫应答的起始环节，进一步阐明维生素A增强儿童抗感染免疫力的机制。二、通过建立维生素A缺乏的动物模型，研究维生素A对粘膜树突状细胞的数量、分布、成熟分化、抗原识别和细胞因子产生等的影响，探讨维生素A调节粘膜免疫的作用及其分子机制，为临床正确使用维生素A营养防治疾病提供理论和实验依据。方法：一、共收集脐血18份，分离单核细胞后，在体外进行树突状细胞的诱导培养，分为：对照组、全反式视黄酸组（RA组）、RARα特异性拮抗剂组（RO组）、RA+RO组。采用流式细胞仪检测不成熟树突状细胞（CDla+HLA-DR+）和成熟树突状细胞（CD83+HLA-DR+）表面标记及HLA-DR荧光强度，观察RA或／和RO对树突状细胞分化、成熟的影响；通过混合淋巴反应，观察RA或／和RO对树突状细胞刺激T细胞增殖能力的作用；采用ELISA法和RT-荧光定量PCR法测定细胞因子，研究RA或／和RO在树突状细胞对Th细胞极向分化调节中的作用。二、建立维生素A缺乏的大鼠动物模型，应用免疫组化、RT—荧光定量PCR和ELISA的方法，观察维生素A缺乏对粘膜树突状细胞数目（OX-62阳性细胞数）、成熟度（CD80、CCR7的阳性面积）；抗原识别受体（TLR2和TLR4的阳性面积）和信号转导（MyD88的基因转录水平）、以及对细胞因子蛋白和基因转录水平的影响；并观察视黄酸受体的6种亚型在粘膜的表达情况。结果：体外培养结果显示，RA：1、延迟脐血单核细胞向树突状细胞的分化，并使其成熟明显受抑；2、抑制树突状细胞对异体T细胞增殖的作用；3、下调Th1细胞因子（IL-12、IFN-γ），上调Th2细胞因子（IL-4、IL-10）；4、当RO与RA同时加入时则可完全逆转RA的上述作用。动物实验结果显示：维生素A缺乏，1、可增加气管和回肠末端粘膜树突状细胞的数目；2、增加气管粘膜TLR2表达，对TLR4的影响不明显，上调MyD88的mRNA水平，促进回肠集合淋巴小结中TLR2、TLR4的蛋白表达；3、增加回肠集合淋巴小结中CCR7的表达，但对气管粘膜细胞CD80和CCR7无明显影响；4、明显增加粘膜中IL-12的表达，对IFN-γ的影响却不明显（气管）或下降（肠道），减少Th2细胞因子的产生，尤以气管明显（IL-4、IL-6均明显下降），下调气管和肠道调节性细胞因子JL-10的蛋白表达；5、视黄酸受体的6个亚型在气管和肠道粘膜均有表达，维生素A缺乏主要下调RARα的蛋白和mRNA水平，而对其他5种受体亚型影响不明显。结论：1、视黄酸可抑制体外培养的脐血单核细胞向树突状细胞的分化和成熟，降低其刺激异体T淋巴细胞反应的能力，使免疫应答反应向Th2方向偏移，有利于抗体产生，从而增强体液免疫功能。2、RARα参与了视黄酸对脐血树突状细胞的调节作用。3、维生素A缺乏大鼠粘膜树突状细胞增多，成熟度增加，对病原体抗原的识别和递呈增加；4、维生素A缺乏大鼠气管粘膜Th2细胞因子的产生减少；肠道粘膜Th1细胞因子IFN-γ和调节性细胞因子IL-10的表达都下降，可能是其粘膜免疫功能降低的机制。5．视黄酸受体的6个亚型在气管和肠道粘膜均有不同水平的表达，维生素A缺乏主要下调RARα的表达。

论文目录

• 1.中文摘要
• 2.英文摘要
• 3.前言
• 4.第一部分 维生素A对脐血树突状细胞分化、成熟和功能的影响及其作用途径
• 对象和方法
• 结果
• 讨论
• 5.第二部分 维生素A营养状态对粘膜DC的影响及其意义
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 6.参考文献
• 7.综述
• （1）、树突状细胞在粘膜免疫中的作用及其机制探讨
• （2）、维生素A与粘膜抗感染免疫作用的研究进展
• 8.后记
• 致谢
• 研究生在读期间发表论文