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血通灵冲剂抗肿瘤侵袭转移相关机制研究

2020-12-06阅读(362)

血通灵冲剂抗肿瘤侵袭转移相关机制研究

论文摘要

金属蛋白酶-9是肿瘤细胞侵袭和转移中起关键作用的酶。本文探讨中药传统方剂血通灵抑制PMA诱导人乳腺癌细胞（MCF-7）金属蛋白酶-9表达的作用机制。研究中发现,血通灵的乙酸乙酯提取物（HE:Hyul-Tong-Ryung EtOAt extract,根据药物韩文名发音的首写子母和提取溶剂的首写子母组合而成）在低剂量条件下选择性的显著抑制不同癌细胞及正常细胞中金属蛋白酶活性的表达,同时在细胞侵袭实验中发现,该提取物能显著抑制豆蔻酰佛波醇乙酯（PMA）诱导人乳腺癌细胞侵入人工基底膜的能力。蛋白印迹实验（Western blot）发现,HE抑制MMP-9的蛋白表达,提示HE的活性作用靶点可能位于MMP-9基因转录调控部位。RT-PCR及启动子活性分析实验表明,此推测的正确性。Western blot和电泳迁移率（EMSA）实验进一步对人乳腺癌细胞信号通路检测中发现,激活蛋白（AP-1）转录因子的异源二聚体c-Jun磷酸化在给药后显著下调,因此阻止了AP-1的激活,相关文献报导指出,在AP-1的上游信号通路中丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）家族的ERK1/2,JNK,p38,在MMP-9表达调中,发挥重要作用。实验表明,在PMA诱导下的MCF-7细胞中,ERK1/2和部分JNK对MMP-9表达起决定作用,与此同时,HE通过抑制MAPKs信号通路中的调控蛋白因子ERK1/2,部分抑制JNK,阻断了下游AP-1转录因子的激活,抑制金属蛋白酶的表达,发挥其潜在抗肿瘤细胞的侵袭和转移作用。

论文目录

  • 中文摘要
  • Abstract
  • 第一章 前言
  • 第一节.肿瘤发生发展的分子作用机制
  • 1.1 人类肿瘤发病的环境及遗传因素
  • 1.2 肿瘤发生的分子生物学机理
  • 1.3 肿瘤发展的病理学进程
  • 第二节.肿瘤侵袭转移在肿瘤发展过程中的重要作用
  • 2.1 肿瘤侵袭转移
  • 第三节.金属蛋白酶（MMPS）简介
  • 3.1.金属蛋白酶（MMPs）的分类
  • 3.2 金属蛋白酶（MMPs）结构特点
  • 3.3 酶原的激活
  • 3.4 金属蛋白酶MMPs的生理功能
  • 第四节.金属蛋白酶-9（MMP-9）结构及功能介绍
  • 4.1 MMP-9与肿瘤侵袭转移及动脉粥样硬化斑块稳定的关系
  • 4.2 MMP-9的基因结构特点
  • 4.3 体内金属蛋白酶的表达
  • 4.4 细胞因子和生长因子对MMP-9表达的影响
  • 第五节.抑制MMP-9的抗肿瘤转移药物
  • 第六节 立题依据
  • 第七节 课题研究思路
  • 第二章 血通灵乙酸乙酯提取物（HE）对MMP-9的抑制作用
  • 1 实验材料
  • 1.1 细胞株
  • 1.2 主要试剂
  • 1.3 主要仪器
  • 2 实验方法
  • 2.1 主要试剂配置
  • 2.2 血通灵（Hyul-Tong-Ryung,HTY）提取
  • 2.3 明胶酶谱实验
  • 2.4 XTT实验
  • 2.5 Western blot实验
  • 3 实验结果
  • 3.1 HTY乙酸乙酯层提取率
  • 3.2 明胶酶谱筛选HTY活性部位检测
  • 3.3 XTT检测
  • 3.4 HE对MMP-9活性检测
  • 3.5 Western blot检测
  • 4 小结与讨论
  • 第三章 HE对人乳腺癌MCF-7细胞侵袭转移的影响
  • 1 实验材料
  • 1.1 细胞株
  • 1.2 主要试剂
  • 1.3 主要仪器
  • 2 实验方法
  • 2.1 实验原理
  • 2.2 实验步骤
  • 3 实验结果
  • 4 小结与讨论
  • 第四章 HE抑制MMP-9 mRNA的表达
  • 1 实验材料
  • 1.1 细胞株
  • 1.2 主要试剂
  • 1.3 主要仪器
  • 2 实验方法
  • 2.1 RT-PCR
  • 2.2 双荧光素酶报告基因检测实验
  • 3 实验结果
  • 3.1 MMP-9mRNA表达
  • 3.2 RT-PCR条带灰度分析
  • 3.3 TIMPmRNA表达
  • 3.4 MMP-9-WT启动子活性检测
  • 4 小结与讨论
  • 第五章 HE抑制MMP-9相关转录因子的激活
  • 1 实验材料
  • 1.1 细胞株
  • 1.2 主要试剂
  • 1.3 主要仪器
  • 2 实验方法
  • 2.1 双荧光素酶报告基因检测实验步骤
  • 2.2 电泳迁移实验（Gel mobility shift asay EMSA）
  • 2.3 Western实验步骤
  • 3 实验结果
  • 3.1 启动子报告基因检测
  • 3.2 EMSA实验
  • 3.3 核蛋白提取物的Wstern blot检测
  • 3.4 Western blot条带灰度分析
  • 4 小结与讨论
  • 第六章 HE对PMA诱导MMP-9相关信号通路的调控
  • 1 实验材料
  • 1.1 细胞株MCF-7
  • 1.2 主要试剂
  • 1.3 主要仪器
  • 2 实验方法
  • 2.1 明胶酶谱实验
  • 2.2 Western blot实验
  • 2.3 EMAS实验
  • 3 实验结果
  • 3.1 明胶酶谱实验
  • 3.2 明胶酶谱条带灰度分析
  • 3.3 Western blot磷酸化水平检测（1）
  • 3.4 MAPKs抑制剂对AP-1活性作用影响
  • 3.5 Western blot磷酸化水平检测（2）
  • 4 小结与结论
  • 第七章 总结
  • 实验创新点
  • 展望
  • 参考文献
  • 致谢
  • 硕士期间发表文章

    • 相关论文文献

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