五种重组结核菌蛋白在痰菌阳性肺结核病诊断中的价值研究

论文摘要

目的：探讨基因重组技术所得的结核分支杆菌蛋白Mtb8.4、HSP60、Ag85-B、MPT64和MPT63应用于肺结核病酶联免疫吸附试验的诊断价值。方法：分别以组合结核菌重组蛋白Mtb8.4、HSP60、Ag85-B、MPT64和MPT63为标记抗原，用ELISA法分别检测血清中的特异性抗体的水平的敏感度、特异度，和求得ROC曲线检验。结果：166例肺结核病人组，Mtb8.4、HSP60、Ag85-B、MPT64和MPT63的检测敏感度分别为47.0％，、72.9％、59.6％、66.3％和62.0％。15例肺肿瘤病人组，其检测敏感度分别为60.0％、53.3％、53.3％、40.0％和80.0％。71例健康人组，其检测特异度分别为93.0％、88.7％、91.6％、91.9％和87.3％。联合各蛋白后的检测敏感度和特异度分别是：两种联合组中肺结核病人组敏感度最高组为HSP60、MPT64组和HSP60、MPT63组，分别为81.9％、81.9％，其特异度为85.9％、85.9％，其对肺肿瘤病人组的敏感度为66.7％、80.0％；三种联合组中肺结核病人组敏感度最高组为HSP60、Ag85-B和MPT64联合组，其敏感度为85％，其特异度为78.9％，肺肿瘤病人组的敏感度为66.7％；四种联合组中肺结核病人组敏感度最高组为Mtb8.4、HSP60、Ag85-B和MPT64联合组，其敏感度为87％，特异度为76.1％，肺肿瘤病人组的敏感度为66.7％。五种联合组中肺结核病人组敏感度为90.2％，其特异度为76.1％，肺肿瘤病人组的敏感度为80％。将以上各联合组行简单的蛋白混合后的检测肺结核病组的敏感度和特异度如下：HSP60、MPT64混合组的敏感度为9.09％，特异度为97.80％；HSP60、Ag85-B、MPT64混合组的敏感度为4.80％，特异度为100％；Mtb8.4、HSP60、Ag85-B、MPT64和MPT63混合组的敏感度为21.40％，特异度为95.20％。结论1．联合应用多种重组结核杆菌蛋白作为抗原应用于肺结核的血清学诊断，在保持较好的特异度的情况时，可以有效的提高敏感度。五种蛋白联合使用组的检测敏感度为90.2％，特异度为76.1％，肺肿瘤病人组的敏感度为80％。2．五种重组结核杆菌蛋白作为抗原应用于结核病血清学诊断时有筛选价值，但无确认价值。3．五种重组结核杆菌蛋白作为抗原应用于肺结核与肺肿瘤的血清学鉴别诊断，无应用价值。4．本实验证明，简单混合各种重组蛋白溶解于包被液中应用于肺结核病人的ELISA血清学无诊断价值，寻找重组蛋白的其它修饰物或混合方式可用于其血清学诊断。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 前言
• 1.1 研究意义
• 1.2 研究现状
• 第二章 材料和方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 主要仪器设备
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 试剂配制
• 2.2 方法
• 2.2.1 重组结核杆菌蛋白的溶解与保存
• 2.2.2 重组结核杆菌蛋白的PEG电泳
• 2.2.3 病历收集/标本收集
• 2.2.4 最佳包被浓度以及酶标二抗浓度的方阵滴定
• 2.2.5 ELISA法测定所有的阴性和阳性血清
• 2.2.6 排列组合各蛋白的测定结果
• 2.2.7 按最适组合混合蛋白进行重选
• 2.2.8 统计学处理
• 第三章 实验结果
• 3.1 电泳结果
• 3.2 最佳包被浓度以及酶标二抗浓度
• 3.3 单个蛋白系统的检测结果以及各排列组合结果
• 3.4 简单混合后的结果
• 3.5 敏感度特异度综合结果
• 3.6 混合后的敏感度、特异度结果
• 3.7 综合各蛋白及排列组合的敏感度、特异度结果
• 3.8 统计学处理结果
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 附录