论文摘要
黑素瘤是恶性程度很高的皮肤肿瘤,预后不良,其发生机制目前仍不十分清楚。肿瘤抑制基因在黑素瘤的发生、发展中具有重要的作用。ING4基因是一种新的肿瘤抑制基因,其功能还不完全清楚。目前国内外尚未见有关其与黑素瘤的研究报道。本研究旨在探讨ING4在黑素瘤发病机制中的作用及机制。（1）ING4在黑素瘤组织中的表达经免疫组化法检测发现,ING4在皮肤黑素瘤组织中的表达明显下调,与良性色素痣组织对比,差异有显著性。（2）ING4重组表达质粒的构建及细胞转染通过RT-PCR法从人的正常组织获得目的基因片断,体外构建真核表达载体pCDNA3.1-ING4,经PCR及基因测序证实重组质粒构建正确。将其转导入人黑素瘤细胞株M14,经免疫细胞化学及蛋白印迹法证实转染的外源ING4基因可高效表达ING4蛋白。（3）ING4对M14细胞生长的影响经MTT、流式细胞术及TUNEL法检测发现,转染外源性ING4基因后,M14细胞的增殖明显受抑,凋亡增加,并伴有G2/M期阻滞。此外蛋白印迹法还发现,M14细胞呈现细胞周期调控蛋白表达的变化及凋亡通路的活化。（4）ING4对M14细胞侵袭能力的影响经重组基底膜侵袭实验、MTT法、Transwell小室法及明胶酶谱法观察发现,ING4能够抑制M14细胞的体外粘附和侵袭穿过基底膜的能力,但并不影响其运动能力。ING4能够抑制M14细胞分泌MMP2和MMP9,从而降低其降解细胞外基质及基底膜的能力。结论ING4可能参与了黑素瘤的发生、发展,并可能为黑素瘤发生机制之一。ING4在体外能够有效地抑制M14细胞的生长及侵袭,并可影响其细胞周期的进程及明显增加其凋亡。ING4对M14细胞增殖的抑制作用及凋亡的促进作用,可能是通过对其细胞周期以及凋亡信号通路活化的调控而实现的。
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标签：黑素瘤论文; 基因表达论文; 免疫组化论文; 细胞株论文; 真核表达载体论文; 转染论文; 增殖论文; 凋亡论文; 侵袭论文; 转移论文;