多重PCR技术在快速检测耐甲氧西林葡萄球菌中的研究与应用

论文摘要

目的 采用多重聚合酶链反应(PCR)检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)及耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS),并对青岛地区耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的流行病学情况进行调查。 方法 利用microscan细菌鉴定仪检测出葡萄球菌262株,其中金葡菌86株,凝固酶阴性葡萄球菌176株,用葡萄球菌属的16S rRNA通用引物、耐甲氧西林的mecA基因引物和金葡菌的femA基因引物进行多重PCR扩增,与琼脂稀释法作比较。并对青岛地区MRS的流行病学情况进行统计分析。 结果 葡萄球菌属的16S rRNA、mecA基因和femA基因的特异基因片断PCR扩增产物分别是:1088bp、165bp和314bp。对262株葡萄球菌的扩增产物进行凝胶电泳后,发现:262株葡萄球菌均出现1088bp区带;86株金葡菌均出现314bp条带,其中67株出现165bp和314bp两条区带;176株CNS中139株出现165bp区带。以琼脂稀释法为金标准,以mecA基因阳性判断耐甲氧西林葡萄球菌,204株琼脂法阳性的,mecA基因均为阳性,58株琼脂法阴性的,有2株mecA基因阳性,其敏感性为100%,特异性为96.6%,阴性预测值为100%,阳性预测值为99.0%;以mecA基因和femA基因阳性判断MRSA,66株琼脂法阳性的,mecA基因和femA基因均为阳性,196株琼脂法阴性的,有1株mecA基因和femA基因阳性,敏感性为100%,特异性为99.5%,阴性预测值为100%,阳性预测值为98.5%。青岛地区MRS的流行病学调查结果:葡萄球菌耐药率为78.6%,其中凝固酶阴性葡萄球菌耐药率为79.0%,金黄色葡萄球菌中耐药率为78.0%。 结论 多重PCR技术检测mecA基因能快速、敏感、准确地检测耐甲氧西林葡萄球菌,与femA基因的联合检测能有效的检测MRSA。MRS已成为日益严重的葡萄球菌感染问题

论文目录

• 1 前言
• 2 材料和方法
• 2.1 实验仪器
• 2.2 材料
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 引物的设计
• 2.3.2 细菌DNA的提取
• 2.3.3 目的基因的PCR扩增
• 2.3.4 临床标本的常规细菌学检测及多重PCR的检测
• 3 结果
• 3.1 多重PCR扩增的敏感性
• 3.2 多重PCR扩增的特异性
• 3.3 262株葡萄球菌的多重PCR扩增结果
• 3.4 多重PCR扩增法与琼脂稀释法的结果比较
• 3.5 耐甲氧西林葡萄球菌的流行病学调查
• 4 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 综述
• 综述参考文献
• 致谢
• 学位独创性声明