绞股蓝总皂苷对氧化应激诱导PC12细胞损伤的保护作用的研究

绞股蓝总皂苷对氧化应激诱导PC12细胞损伤的保护作用的研究

论文摘要

缺血性脑血管疾病(ischemic cerebrovascular disorders, ICD)是指某动脉供血区的血流短暂或永久的减少或中断而导致的中枢神经系统疾病,约占全部脑卒中的80%。对于缺血性脑血管疾病的治疗,目前仍以溶栓治疗为主,但应用中存在出血和再灌注损伤的危险和限制,而且,缺血脑组织发生再灌注十分常见。脑缺血-再灌注(cerebral ischemia-reperfusion, CIR)损伤是指脑组织经历一定时间的缺血后恢复血流供应,使缺血性损伤进一步加重的现象。因此探讨缺血性脑损伤的机制,积极开发保护缺血性脑损伤的药物具有重大的理论意义和临床价值。绞股蓝总皂苷(Gypenosides, GP)对缺血性脑血管疾病的治疗目前国内报导较少。研究资料证实绞股蓝总皂苷具有改善动脉血流、抗血栓形成、改善血液流变学指标、以及降低血小板聚集率等作用。绞股蓝总皂苷对脑缺血缺氧时受损的神经细胞具有怎样的保护作用及其机制有待进一步研究证实。本课题采用0.1mmol/L H2O2损伤大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(pheochromocytoma cell, PC12 cell)来建立氧化应激损伤模型。H2O2是缺血缺氧时体内氧化代谢的中间产物,如果大量积聚能够产生细胞毒性作用。PC12细胞具有神经元的基本生物学特性,而且容易培养可传代,是一个比较理想的细胞模型。用MTT法检测细胞存活力,同时检测细胞培养液上清中LDH、SOD和MDA等指标,流式细胞术检测细胞凋亡率,并检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达情况。结果显示,绞股蓝总皂苷能够提高H202损伤PC12细胞的存活率,降低LDH的漏出量,提高SOD的活性及降低MDA的含量。流式细胞术结果表明,绞股蓝总皂苷能够提高H2O2损伤PC12细胞的凋亡百分率。流式细胞术、免疫组化及Westernblot方法检测显示,绞股蓝总皂苷能够促进Bcl-2蛋白的表达,并且抑制Bax蛋白的表达。结果提示绞股蓝总皂苷的保护作用可能是通过促进Bcl-2的表达,并且抑制Bax的表达,进而抑制神经细胞凋亡,从而发挥其对缺氧性损伤的保护作用。综上所述,绞股蓝总皂苷对H2O2氧化应激损伤的PC12细胞具有保护作用,其机制可能通过提高机体抗氧化酶活性,增强自由基清除能力,减轻脂质过氧化损伤以及促进抗凋亡基因Bcl-2的表达,并且抑制Bax的表达,抑制神经细胞的凋亡而产生保护作用。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 前言
  • 第二章 材料与方法
  • 2.1 实验材料
  • 2.2 实验方法
  • 2.3 统计学处理
  • 第三章 结果
  • 3.1 绞股蓝总皂苷对PC12细胞存活率和LDH含量的影响
  • 3.2 绞股蓝总皂苷对PC12细胞SOD活性和MDA含量的影响
  • 3.3 流式细胞仪检测细胞凋亡率
  • 3.4 流式细胞仪检测PC12细胞内Bcl-2和Bax蛋白表达
  • 3.5 免疫组化检测PC12细胞内Bcl-2和Bax蛋白表达
  • 3.6 Western blotting法检测PC12细胞内Bcl-2和Bax蛋白表达
  • 第四章 讨论
  • 第五章 结论
  • 致谢
  • 参考文献
  • 综述
  • 综述参考文献
  • 相关论文文献

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