橡胶树胶乳中4种植物激素的液相色谱检测法研究

论文摘要

对胶乳中玉米素(ZT)、赤霉素(GA)、生长素(IAA)和脱落酸(ABA)等4种植物激素进行分离和纯化,并用高效液相色谱(HPLC)法对它们进行定性和定量研究,开发出了一套分离和检测上述激素的HPLC法。获得了一种提取胶乳中GA、IAA、ABA和IPA等4种植物激素分离和纯化的方法：用80%预冷甲醇浸提,离心,离心后的上清液过C18预处理柱,调节pH后用乙酸乙酯萃取,然后用高效液相色谱方法进行纯化。在检测时,对这4种激素采用等度洗脱,流动相为甲醇、乙腈和0.5%的乙酸(20/20/60v/v)。在采用其他植物组织中植物激素的提取方法时,未曾检测到上述4种激素中的任何一种。获得了一种适合胶乳中ZT、GA、IAA和ABA等4种植物激素分离和纯化的方法：用80%预冷甲醇浸提,离心,离心后的上清液减压蒸发至水相,水相调节pH后用固相萃取柱进一步纯化,首先洗脱下GA、IAA和ABA,再洗脱下ZT,然后用高效液相色谱方法进行分离、测定。获得了一种检测胶乳中ZT、GA、IAA和ABA等4种激素的洗脱方法：对ZT采用等度洗脱,流动相为甲醇和0.5%的乙酸(20/80v/v),分析时间为10min,ZT在等度洗脱条件下的出峰时间(min)是5.426,回收率是87%；对GA、IAA和ABA采用梯度洗脱,流动相为甲醇和0.5%的乙酸(20/80v/v),分析时间为34min GA、IAA和ABA在梯度洗脱条件下的出峰时间(min)分别为：13.377、16.581和18.988,回收率分别为70%、82%和92%。由于对这4种激素分别检测,这就降低了每份样品中杂质的浓度,取得了良好的分离、检测效果。研究表明,试验重现性好,整个提取流程相当简便,适合胶乳中内源激素的分离与测定。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 1 前言
• 1.1 植物激素的种类和功能
• 1.1.1 生长素
• 1.1.2 赤霉素
• 1.1.3 脱落酸
• 1.1.4 细胞分裂素
• 1.1.5 乙烯
• 1.1.6 其他天然生长物质
• 1.1.6.1 油菜素内脂
• 1.1.6.2 多胺
• 1.1.6.3 茉莉酸
• 1.1.6.4 水扬酸
• 1.2 植物激素的检测方法
• 1.2.1 生物测定法
• 1.2.2 免疫测定法
• 1.2.3 理化测定法
• 1.2.3.1 电化学法
• 1.2.3.2 光谱法
• 1.2.3.3 色谱法
• 1.3 橡胶树植物激素方面的研究进展
• 1.4 本研究的目的和意义
• 2. 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 供试材料
• 2.1.2 主要试剂和药品
• 2.1.3 主要仪器
• 2.2 标准品的配制
• 2.3 胶乳中植物激素检测方法的试验
• 2.3.1 GA、IAA、ABA和IPA的检测方法中色谱柱类型、流速、检测波长、柱温、进样量和缓冲溶液的试验
• 2.3.2 GA、IAA、ABA和IPA的检测方法中洗脱液及洗脱方法的选择
• 2.3.3 ZT、GA、IAA和ABA的检测方法中洗脱液及洗脱方法的选择
• 2.4 胶乳中植物激素的提取方法
• 2.4.1 胶乳中GA、IAA、ABA和IPA的提取方法Ⅰ
• 2.4.1.1 样品的采集
• 2.4.1.2 脱色
• 2.4.1.3 初步纯化
• 2.4.1.4 固相萃取（SPE）
• 2.4.1.5 液相色谱分析
• 2.4.2 胶乳中GA、IAA、ABA和IPA的提取方法Ⅱ
• 2.4.2.1 样品的采集
• 2.4.2.2 样品的预处理
• 2.4.2.3 固相萃取（SPE）
• 2.4.2.4 液相色谱分析
• 2.4.3 胶乳中GA、IAA、ABA和IPA的提取方法Ⅲ
• 2.4.3.1 样品的采集
• 2.4.3.2 样品预处理
• 2.4.3.3 固相萃取（SPE）
• 2.4.3.4 液相色谱分析
• 2.4.4 胶乳中GA、IAA、ABA和IPA的提取方法Ⅳ
• 2.4.4.1 样品的采集
• 2.4.4.2 样品预处理
• 2.4.4.3 液-液萃取（LLE）
• 2.4.4.4 液相色谱分析
• 2.4.5 胶乳中ZT、GA、IAA和ABA的提取
• 2.4.5.1 胶乳中ZT、GA、IAA和ABA性质的分析及所用提取方法的介绍
• 2.4.5.2 用HLB柱提取胶乳中ZT、GA、IAA和ABA的方法
• 2.4.5.2.1 样品的采集
• 2.4.5.2.2 样品预处理
• 2.4.5.2.3 固相萃取（SPE）
• 2.4.5.3 用MAX柱提取胶乳中ZT、GA、IAA和ABA的方法
• 2.4.5.3.1 样品的采集
• 2.4.5.3.2 样品预处理
• 2.4.5.3.3 固相萃取（SPE）
• 2.4.5.4 用PXC柱提取胶乳中ZT、GA、IAA和ABA的方法
• 2.4.5.4.1 样品的采集
• 2.4.5.4.2 样品预处理
• 2.4.5.4.3 固相萃取（SPE）
• 2.4.6 胶乳中ZT、GA、IAA和ABA的3种SPE方法回收率的测定
• 3. 结果与分析
• 3.1 检测方法中色谱柱类型、流速、检测波长、柱温、进样量和缓冲溶液的试验结果
• 3.2 GA、IAA、ABA和IPA洗脱方法的试验结果
• 3.3 胶乳中GA、IAA、ABA和IPA提取方法的试验结果
• 3.3.1 采用2.4.1提取方法的试验结果
• 3.3.2 采用提取方法Ⅱ的试验结果
• 3.3.3 采用提取方法Ⅲ的试验结果
• 3.3.4 采用提取方法Ⅳ的试验结果
• 3.4 ZT、GA、IAA和ABA洗脱方法的试验结果
• 3.4.1 ZT洗脱方法的试验结果
• 3.4.2 GA、IAA和ABA洗脱方法的试验结果
• 3.5 胶乳中ZT、GA、IAA和ABA的3种提取方法试验结果的比较
• 3.5.1 用HLB柱提取胶乳中ZT、GA、IAA和ABA的结果
• 3.5.2 用MAX柱提取胶乳中ZT、GA、IAA和ABA的方法
• 3.5.3 用PXC柱提取胶乳中ZT、GA、IAA和ABA的方法
• 3.5.4 用PXC柱提取样品的回收率
• 4 讨论
• 4.1 胶乳中植物激素检测时洗脱方式的选择
• 4.2 胶乳中植物激素提取方法的研究
• 4.3 胶乳中植物激素的液相色谱检测法与其他方法的比较
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢