链霉菌（Streptomyces SP103）发酵液抗菌活性的物质基础研究

论文摘要

研究表明,有些植物内生真菌由于长期与宿主共处,有可能产生与宿主相同或相似的活性物质,也可能产生有利于增强宿主抵抗力的活性物质。因此,本文以黄山采集来的千层塔为原料,进行了内生真菌的分离、活性菌株的筛选以及初步探讨了其生物活性的物质基础,具体研究内容如下：（1）从千层塔中分离到87株内生真菌,其中67株菌株的发酵液对四种病原真菌（苹果轮纹、苹果炭疽、小麦赤枯、油菜菌核）有抑制作用,其中,对小麦赤枯、苹果轮纹、苹果炭疽和油菜菌核具有抑制作用的菌株所占的比例分别为：42.5%、40.2%、60.9%和57.5%。（2）选取活性较好的菌株Streptomyces SP103,用发酵罐发酵,将发酵液离心,分为发酵液和菌丝体,采用生长速率法测定了其对病原真菌的相对抑制率。发酵液对苹果轮纹和油菜菌核的相对抑制率最好,几乎看不到菌丝生长,其相对抑制率为100%；对苹果炭疽和小麦赤枯的相对抑制率也分别为83.4%和81.3%。（3）采用柱层析、薄层层析等分离手段对Streptomyces SP103发酵产物的不同部位进行分离,并追踪各部分的生物活性,活性部位主要为80%乙醇部分和乙酸乙酯萃取部分（C3和D3）。（4）通过硅胶柱层析、薄层层析、凝胶（Sephadex LH-20）层析等方法,从发酵液中分离到了3个化合物,通过1HNMR、GC-MS等光谱技术鉴定了其中的3种化合物,分别为苯甲酸苄酯、山萘酚、7H-6,9a-Methano-4H-cyclopenta[9,10]cyclopropa[5,6]cycl-odeca[1,2-d]-1,3-dioxin-13-one,6,6a,7a,8,9,12,12a,12b-octahydro-12,12a-dihydroxy-2,2,7,7,9 ,11-hexamethyl-,[6R-（6.alpha.,6a.alpha.,7a.alpha.,9.alpha.,9a.alpha.,12.beta.,12a.beta.,12b.alp ha.）]。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 内生真菌综述
• 1.1 内生真菌研究进展
• 1.2 内生菌药用活性物质
• 1.2.1 抗肿瘤物质类
• 1.2.2 抗生素类
• 1.2.3 毒性物质类
• 1.2.4 抗糖尿病物质类
• 1.2.5 植物生长调节物质类
• 1.2.6 活性酶类
• 1.2.7 抗氧化活性类
• 1.3 链霉菌代谢产物研究进展
• 1.4 千层塔简介
• 1.5 立题依据
• 参考文献
• 第二章 链霉菌Streptomyces SP103的分离、筛选
• 2.1 材料和方法
• 2.1.1 材料和仪器
• 2.1.2 常用培养基的配制
• 2.1.3 方法
• 2.1.3.1 组织表面消毒
• 2.1.3.2 分离与纯化
• 2.1.3.3 内生真菌的液体培养
• 2.1.3.4 抑制植物病原真菌活性的检测
• 2.2 实验结果与讨论
• 参考文献
• 第三章 链霉菌Streptomyces SP103的发酵液活性初步研究
• 3.1 材料和仪器
• 3.2 方法
• 3.2.1 常用培养基的配制
• 3.2.2 发酵不同时间的发酵液的活性检测
• 3.2.3 Streptomyces SP103的培养
• 3.2.4 抑制植物病原真菌活性的检测
• 3.3 结果与讨论
• 第四章 链霉菌Streptomyces SP103发酵产物抗菌活性初步筛选
• 4.1 材料、试剂和仪器
• 4.2 方法
• 4.2.1 常用培养基的配制
• 4.2.2 Streptomyces SP103的培养
• 4.2.3 抑制植物病原真菌活性的检测
• 4.2.4 发酵产物中活性物质的分离提取
• 4.2.5 碘化铋钾显色
• 4.3 实验结果
• 4.3.1 对小麦赤霉的抑制作用
• 4.3.2 对苹果轮纹的抑制作用
• 4.3.3 对油菜菌核的抑制作用
• 4.3.4 对苹果炭疽的抑制作用
• 4.3.5 碘化铋钾喷雾显色结果
• 4.4 讨论
• 第五章 链霉菌Streptomyces SP103发酵产物次生代谢产物的分离和化合物的鉴定
• 5.1 材料和法
• 5.1.1 仪器与试剂
• 5.1.2 发酵条件
• 5.1.3 分离纯化方法
• 5.1.3.1 柱层析
• 5.1.3.2 薄层板的制备
• 5.1.3.3 显色剂的配制
• 5.1.4 抗病原真菌的检测方法
• 5.2 菌株的发酵
• 5.3 发酵液活性物质的提取
• 5.3.1 有机溶剂萃取提取
• 5.3.2 各部分的分离流程
• 5.4 化合物的鉴定
• 5.4.1 化合物Ⅰ
• 5.4.2 化合物Ⅱ
• 5.4.3 化合物Ⅲ
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表的论文
• 致谢