新癌基因NGAL的新型TPA反应激活蛋白的分离与初步鉴定

论文摘要

分别应用寡核苷酸亲和层析法,改进后的寡核苷酸亲和层析法和离心管层析法从TPA诱导后的食管癌细胞EC109中分离调控NGAL诱导表达的TPA反应激活蛋白,通过EMSA、SDS-PAGE结合银染判定这三种方法的优缺点,并应用生物质谱结合生物信息学等手段对这些蛋白进行初步鉴定。寡核苷酸亲和层析法能够分离纯化一定丰度的TPA反应激活蛋白,但存在较多Tween 20的干扰;离心管层析法操作流程简单,快捷,但获得的激活蛋白较少,不利于下一步的质谱鉴定;改进后的寡核苷酸亲和层析法排除了Tween 20的干扰,能够分离纯化低背景、高丰度的激活蛋白。通过生物质谱并结合生物信息学等手段分析,初步筛选出12个调控NGAL诱导表达的TPA反应激活蛋白,这其中大部分为尚未报道的新型TPA反应激活蛋白。通过本实验,建立了稳定的改进后寡核苷酸亲和层析法技术平台,并初步筛选出12个调控NGAL表达的新型TPA反应激活蛋白。

论文目录

• 提要
• 第一章 前言
• 1 NGAL 概述
• 2 DNA 亲和层析
• 第二章 NGAL 的TPA 反应激活蛋白的分离与初步鉴定
• 1 设备及试剂
• 1.1 仪器和设备
• 1.2 试剂和材料
• 2 实验方法
• 2.1 细胞培养
• 2.2 细胞核蛋白提取
• 2.3 Bradford 测蛋白含量
• 2.4 层析介质的制备
• 2.5 EMSA
• 2.6 银染
• 2.7 寡核苷酸亲和层析法
• 2.8 改进的寡核苷酸亲和层析法
• 2.9 离心管亲和层析法
• 2.10 质谱鉴定及生物信息学分析
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 小结
• 参考文献
• 附录 溶液的配制
• 中文摘要
• 英文摘要
• 致谢
• 导师简介
• 作者简介