论文摘要
本文探讨了氨基糖苷类抗生素—核糖霉素的质量研究方法。核糖霉素是核糖苷链霉菌产生的抗生素,对革兰氏阳性、阴性菌均有抑制作用,其活性较卡那霉素稍低,但毒性较小[1-2]。核糖霉素结构中不含紫外吸收基团、极性强、挥发性差,不适合采用HPLC-UV法进行检测。中国药典（2005年版）二部收载了硫酸核糖霉素及注射用硫酸核糖霉素[3],《国家药品标准》（化学药品地方标准上升国家标准第二册）[4]收载有硫酸核糖霉素注射液。日本药局方也收载了该品种。上述药品标准仅收载了微生物法测定硫酸核糖霉素的含量,其有关物质的检查均未见报道。本课题对硫酸核糖霉素的质量研究,包括硫酸核糖霉素有关物质检查方法（TLC法, HPLC-ELSD法）和含量测定方法（HPLC-ELSD法）的建立,以及与传统的微生物法含量测定的比较;并根据WHO对化学参考物质的纯度要求,进行了核糖霉素对照品的相关研究工作。为新版中国药典中核糖霉素原料和制剂的有关物质检查方法和含量测定方法的建立提供了参考,为其原料和制剂在生产过程中的质量控制提供了依据。本研究分为三个部分:一、建立了硫酸核糖霉素中有关物质检查的方法。首先采用了薄层色谱法。由于各国药典均没有收载硫酸核糖霉素有关物质检查项,同时相关的文献资料不多,建立薄层色谱法检测其有关物质时尝试了多种展开系统,以达到最优的分离效果。最终建立的薄层色谱条件是:以硅胶G为吸附剂,以2-丁酮-甲醇-异丙醇-浓氨水-水（10:12:3:8:2）为展开剂,用0.2%的茚三酮的水饱和正丁醇溶液作为显色剂,在110℃干燥20min显色。在该色谱条件下,硫酸核糖霉素原料和注射用硫酸核糖霉素中的主成分和其它杂质能有效分离。其次建立了HPLC-ELSD法测定硫酸核糖霉素中有关物质的方法。国内外已有多篇关于HPLC-ELSD法在氨基糖苷类抗生素中的应用,但未见有关核糖霉素的报道。参考国外有关氨基糖苷类抗生素的文献,以Dionex Acclaim C18柱（4.6mm×250mm,5μm）,以含0.8%五氟丙酸的20mmol/L醋酸铵溶液-甲醇（55:45）作流动相,用蒸发光散射检测器检测,首次建立了硫酸核糖霉素有关物质检查的高效液相-蒸发光散射检测法。所建立的有关物质检查方法在3.9893μg/ml35.904μg/ml的浓度范围内浓度线性良好（r=0.9995）。二、在测定硫酸核糖霉素含量方面,分别采用HPLC-ELSD法和传统微生物法测定了不同厂家共5批硫酸核糖霉素原料和6批注射用硫酸核糖霉素的含量,并分析比较了两者测定的结果。结果显示:对于所有的样品,采用微生物法测定的结果明显高于HPLC-ELSD法测得的结果。这与样品中含有新霉胺等活性杂质有关。上述结果还显示:在硫酸核糖霉素含量测定方面,HPLC-ELSD法能有效排除活性杂质的干扰,比微生物法具有更多的优点。三、建立了核糖霉素对照品的相关研究工作。根据单组分抗生素对照品的确定原则,主成分扣除有机杂质,水分,挥发成分,灰分后为其主成分的纯度。本课题选取一批硫酸核糖霉素原料,分别采用了HPLC-ELSD法测定硫酸核糖霉素主成分,GC法测定了19种有机溶剂的残留,用减压干燥法测定了其中的水分,用炽灼残渣法测定其中的灰分,对其纯度进行了评价。
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