补肾活血法对PCOS排卵障碍及大鼠颗粒细胞影响的研究

论文摘要

目的:从理论上探讨肾虚血瘀与多囊卵巢综合征排卵障碍的内在关系;从临床实验两方面探讨补肾活血法对PCOS排卵障碍的治疗作用和体外培养大鼠颗粒细胞的影响;为治疗PCOS排卵障碍提供思路,丰富和发展中医学“肾主生殖”的理论内涵。方法:1.综述了中医对多囊卵巢综合征病因病机的认识及治疗现状,分析PCOS排卵障碍与肾虚血瘀的关系。2.临床研究:将69例辨证为肾虚血瘀型的PCOS病人随机分为观察组（补肾活血法）和对照组（氯米酚+HCG）,观察组35例,对照组34例,疗程3个月经周期。于治疗前后分别从月经期、量、色、质,中医证候,基础体温,B超下卵巢大小和卵泡数目,女性激素等方面观察补肾活血法改善中医症状、调整女性生殖内分泌及改善卵巢功能和促进排卵的作用。3.实验研究:从大鼠近成熟卵泡分离出颗粒细胞,进行肿瘤坏死因子和雄激素诱导培养后将细胞随机分为观察组（含补肾活血方大鼠血清HY）、阳性对照组（孕马血清,YM）、空白组（无药大鼠血清,KB）和模型组（MX）共4组,进行干预培养。观察各组培养细胞增殖,形态,分泌性激素和细胞胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）及其受体的表达情况,探讨补肾活血含药血清对体外培养大鼠颗粒细胞的作用。结果:1.临床研究部分:①以BBT表示各组排卵改善情况,两组排卵率接近,无显著性差异,p＞0.05;②补肾活血法观察组能较为显著地改善PCOS肾虚血瘀型病人的经质、经量、腰酸膝软、神疲乏力、头晕耳鸣、足跟疼痛等主要症状,其改善主要症状的作用明显优于单纯促排卵西药氯米酚对照组。③两组治疗前后证候积分比较,观察组比对照组明显下降,差异有显著统计学意义（P＜0.01）。两组症候疗效比较,观察组高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。④观察组治疗前后卵巢大小和卵泡数均有明显变化,较治疗前显著改善,差异有显著统计学意义（p＜0.01）;而对照组卵泡数目有减少,但卵巢体积没有明显缩小。说明中药补肾活血法对卵巢的作用更明显.⑤两组治疗后的激素水平分别较其自身治疗前明显下降,差异有显著统计学意义（P＜0.01）;治疗后两组T、及LH/FSH比值下降比较以对照组显著,差异有显著统计学意义（P＜0.01或0.05）,中药对激素的影响在短期内较氯米酚作用相对较小。2.实验研究部分:①10%补肾活血含药血清（BSHXF）对正常大鼠颗粒细胞生长具最佳增殖作用;②BSHXF含药血清培养液对体外诱导培养大鼠颗粒细胞形态学的影响优于各实验组。③BSHXF对体外诱导培养大鼠颗粒细胞分泌E2有促进作用,与空白组比较差异有显著统计学意义（p＜0.01）。对T分泌有抑制作用,与各组比较,差异有显著统计学意义（p＜0.01）;④对IGF-ImRNA表达有促进作用,对IGF-Ⅰ蛋白表达则有抑制作用,与空白组和模型组比较差异有显著统计学意义（p＜0.01）;对IGF-IRmRNA和蛋白表达的影响均呈促进作用,与各组比较差异均有显著统计学意义（p＜0.01）。结论:补肾活血法与氯米酚+HCG促排卵作用相当。但补肾活血法能改善PCOS肾虚血瘀型以月经不调、不孕和卵巢多囊增大为主要表现者的临床证候,其疗效明显优于西药氯米酚+HCG对照组;该法在改善患者的月经量、色、质及头晕耳鸣、腰酸膝软、神疲乏力和足跟疼痛等症状方面比对照组显示出明显的优越性。这对于在改善卵巢功能的基础上进一步提高患者的生活质量有着十分重要的意义。补肾活血法能显著降低PCOS卵巢增大和卵泡闭锁患者的卵巢最大面积和闭锁卵泡数目,能有效缩小PCOS患者的卵巢体积,促进排卵,防止卵泡闭锁。补肾活血法具有降低PCOS患者的高LH血症,高雄激素血症、改善LH/FSH的比例,提高雌激素水平,调整生殖内分泌轴的作用。补肾活血含药血清对体外培养大鼠颗粒细胞生长和E2分泌具有良好的促进作用,而对降低T亦有一定作用,均优于孕马血清的作用。补肾活血含药血清与孕马血清均能促进体外诱导培养大鼠颗粒细胞IGF-IR的基因和蛋白表达,明显优于空白组和模型组,能促进IGF-I的基因表达,但并不提高其蛋白表达,反而下调其蛋白表达。IGF-I蛋白表达水平以模型组最高。提示补肾活血含药血清促进颗粒细胞增殖及性激素分泌（E2、P）与胰岛素样生长因子-Ⅰ受体表达增加有关,但并不是通过增加颗粒细胞上胰岛素样生长因子-Ⅰ的表达而起作用。

论文目录

• 缩略词简表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 正文
• 第一部分 中医关于多囊卵巢综合征的理论阐释
• 1.文献综述
• 1.1 中医对多囊卵巢综合征的病因病机认识
• 1.2 中医治疗多囊卵巢综合征的临床研究
• 1.3 中医对多囊卵巢综合征的实验研究
• 2.肾虚血瘀与多囊卵巢综合征
• 3.导师对PCOS病因病机的认识和诊疗特点
• 4.参考文献
• 第二部分 补肾活血法治疗PCOS排卵障碍的临床研究
• 1.临床资料与方法
• 1.1 病例选择标准
• 1.2 临床资料
• 1.3 观察方法
• 1.4 观察指标与检测方法
• 1.5 疗效评定标准
• 1.6 统计学处理
• 2.结果与分析
• 2.1 基础体温变化及中医证候疗效比较
• 2.2 两组卵巢大小及卵泡数目疗效比较
• 2.3 两组治疗前后女性激素变化比较
• 3.小结
• 3.1 补肾活血法的促排卵作用
• 3.2 补肾活血法改善中医症状及其证候的疗效
• 3.3 补肾活血法逆转卵巢增大及卵泡闭锁的作用
• 3.4 补肾活血法改善生殖内分泌失调的作用
• 4.参考文献
• 第三部分 补肾活血法对体外培养大鼠颗粒细胞影响的实验研究
• 1.材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 补肾活血方含药血清的制备及有效成份检测
• 1.2.2 BSHXF含药血清对体外培养大鼠卵巢颗粒细胞细胞活力的影响
• 1.2.3 肿瘤坏死因子和雄激素诱导颗粒细胞PCOS模型的建立
• 1.2.4 BSHXF干预试验
• 2.观察指标与检测方法
• 2、P、T检测'>2.1 颗粒细胞培养液E₂、P、T检测
• 2.2 颗粒细胞IGF-1及IGF-1R m RNA检测方法
• 2.3 颗粒细胞IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR蛋白表达免疫组化检测方法
• 3.统计学方法
• 4.结果与分析
• 4.1 补肾活血含药血清检测结果分析
• 4.2 补肾活血含药血清对正常大鼠颗粒细胞生长的增殖作用
• 4.3 肿瘤坏死因子不同浓度影响下细胞生长抑制情况
• 4.4 BSHXF对细胞形态学的影响
• 2、T影响'>4.5 BSHXF对体外诱导培养大鼠颗粒细胞分泌E₂、T影响
• 4.6 BSHXF对体外诱导培养大鼠颗粒细胞部分相关生长因子影响
• 5 小结
• 5.1 诱导培养颗粒细胞模型的确定
• 5.2 补肾活血含药血清对颗粒细胞增殖及性激素分泌的影响作用
• 5.3 补肾活血含药血清对颗粒细胞胰岛素样生长因子-Ⅰ及其受体表达的影响
• 6.参考文献
• 7.附图
• 第四部分 讨论
• 1.关于中药含药血清
• 2.关于肿瘤坏死因子（TNF-α）和雄激素（T）诱导培养颗粒细胞模型的构建思路
• 3.肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导颗粒细胞PCOS模型的机理及评价
• 4.补肾活血法治疗PCOS排卵障碍的机理探讨
• 5.胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）与多囊卵巢综合征发病的关系
• 6.本研究的不足之处与研究展望
• 7.参考文献
• 结论
• 致谢
• 附录