论文摘要
目的:采用SD大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,观察再灌注不同时间点大鼠神经功能缺损情况及缺氧诱导因子（hypoxia-inducible factor ,HIF-1α）和热休克蛋白70（heat shock broken 70,HSP70）表达情况,并探讨神经生长因子（NGF）的脑保护机制,为临床应用神经生长因子治疗缺血性脑血管疾病的防治提供理论依据。方法:健康成年SD大鼠45只（由大连医科大学实验动物中心提供）,雌雄不限,体重200g-250g,清洁级,饲养环境温度21℃,自由进食水。随机分为假手术组（n=5）（第1组）;对照组（n=30）,按缺血2h再灌注2h、6h、12h、24h、48h、72h再分为5组（分别为第2、3、4、5、6、7组）,每组5只;神经生长因子组（5只）（第8组）和生理盐水对照组（5只） （第9组）。参照Nagasawa[5]报告的方法,用10%的水合氯醛（0.35毫升/100克腹腔注射）麻醉动物,取仰卧位固定在手术台上,行右侧MCAO手术,颈部正中切口,分离出右侧颈总、颈外和颈内动脉,结扎颈外动脉分支起始处、颈总动脉近心端,在颈总动脉分叉切口处剪一小口,把头端蘸有石蜡的直径为0.20毫米的高弹力鱼线向颈内动脉端插入,继续向前推进直到感觉有轻微阻力,即约18毫米,提示已到大脑中动脉的起始部。2小时后缓慢拔出鱼线即可实施再灌注。动物苏醒后观察其体态及行为,以判断MCAO模型成功。假手术组插入尼龙线后马上抽出,余步骤同手术组。缺血再灌注模型动物清醒后,右侧前肢屈曲内收者为研究对象。第8组大鼠于再灌注后5分钟肌内注射NGF（每100克体重NGF500BU/0.1毫升）,第9组以同样方法注入相同体积的无菌生理盐水。分别观察几组动物的以下指标:Zea Long5分制标准评分进行各组大鼠神经功能评价;经过免疫组化和HE染色检测大鼠脑内HIF-1α和HSP70表达。结果:（1）神经功能评分:2-9组分别为2.000±0.7071,2.200±0.4472,2.400±0.5477,2.600±0.5477,2.800±0.4472,3.000±0.0000,1.200±0.4472,2.200±0.4472,其中NGF组（8组）与相应的缺血再灌注盐水（9组）对照组比较,神经功能障碍明显减轻。（P<0.01）（2）脑缺血再灌注后,大鼠脑内HIF-1α的表达量增多,并于再灌注后2小时达高峰,以后逐渐减少。HSP70于24 h组达高峰,以后减少。（P <0.01）。与缺血再灌注组相比,缺血早期给予NGF（干预）,可使脑内HIF-1α及HSP70的表达增加。（P <0.01）结论:肌肉注射NGF对脑缺血再灌注有明显的保护作用,HIF-1α及HSP70表达增加可能是其机制之一。