热休克蛋白65-MUC1融合蛋白及其抗体检测方法的建立及应用

论文摘要

MUC1 粘蛋白（简称MUC1）是一种肿瘤相关抗原,高表达于多种肿瘤如乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌等细胞表面,为表达MUC1 肿瘤的免疫治疗靶点。卡介苗（BCG）分枝杆菌热休克蛋白（Heat shock protein,HSP65）是一种分子伴侣,可引导与其形成的复合物或融合蛋白的蛋白类抗原进入树突状细胞（DCs）内并经MHC I 类途径加工递呈,从而激活基于抗原特异性CTL 的免疫反应。我室利用基因工程技术生产了HSP65-MUC1融合蛋白（HSP65-MUC1）。HSP65-MUC1 将作为国家一类新药进入治疗表达MUC1 肿瘤的一期临床实验。为了进行HSP65-MUC1的药学、药效学、药代动力学和毒理学的研究,我们建立了双抗体夹心法ELISA及间接法ELISA,并用这两种方法分别检测了HSP65-MUC1在小鼠体内的代谢及组织分布情况,及HSP65-MUC1在小鼠体内产生抗体的情况。结果表明,这两种检测试剂盒是进行上述研究的有利工具。

论文目录

• 引言
• 1.M UC1 的研究背景
• 1.1 MUC1 的基因结构与蛋白质组成
• 1.2 MUC1 的分布
• 1.3 MUC1 的生物学作用
• 1.4 MUC1 的免疫学作用
• 2. 热休克蛋白的研究背景
• 2.1 HSP 的分类
• 2.2 HSP 的作用
• 3. ELISA 的研究背景
• 3.1 ELISA 的原理
• 3.2 ELISA 的类型
• 4. 药代动力学的发展现状
• 4.1 生物检定法
• 4.2 免疫学方法
• 4.3 同位素标记示踪法
• 4.4 色谱法
• 材料与方法
• 1. 实验材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 重组蛋白
• 1.3 主要试剂及设备
• 1.4 试剂的配置
• 2. 双抗体夹心法检测 HSP65-MUC1 融合蛋白方法的建立及应用
• 2.1 HSP65 多克隆抗体的制备
• 2.2 HSP65 多克隆抗体效价的测定
• 4）₂SO₄ 提纯HSP65 多克隆抗体'>2.3 饱和（NH₄）₂SO₄ 提纯HSP65 多克隆抗体
• 2.4 Western blot 法 HSP65 多克隆抗体及MUC1 单克隆抗体特异性的鉴定
• 2.5 以MUC1 单抗为包被抗体的双抗体夹心ELISA
• 2.6 以HSP65 多克隆抗体为包被抗体的双抗体夹心ELISA
• 2.7 以双抗体夹心法检测小鼠体内的HSP65-MUC1 的分布情况
• 3.间接法 ELISA 检测小鼠体内 HSP65-MUC1 抗体方法的建立
• 3.1 间接法ELISA 的原理
• 3.2 方阵滴定确定最佳抗原浓度及酶标二抗工作浓度
• 3.3 等摩尔数HSP65-MUC1、HSP65 以及MUC1 多肽包被,检测抗体产生的量的比较（OD 值的比较）
• 实验结果
• 1. 双抗体夹心法ELISA 方法的建立
• 1.1.H SP65 多克隆抗体的获得及效价测定
• 1.2 抗体特异性的鉴定
• 1.3 夹心ELISA 最佳试剂的确定
• 1.4 夹心法ELISA 方阵法最佳滴定浓度的确立
• 1.5 标准曲线的确定
• 1.6 小鼠组织匀浆HSP65-MUC1 的测定
• 2. 间接ELISA 检测HSP65-MUC1 抗体方法的建立
• 2.1 方阵法确定包被抗原包被浓度及酶标抗体浓度
• 2.2 等摩尔数HSP65-MUC1、HSP65 以及MUC1 多肽包被,检测抗体产生量的比较（OD 值的比较）
• 讨论
• 1. 夹心法 ELISA 检测 HSP65-MUC1 融合蛋白方法的建立
• 1.1 HSP65 多克隆抗体的制备
• 1.2 以MUC1 单克隆抗体为包被抗体的双抗体夹心ELISA
• 1.2 夹心ELISA 最佳反应条件的选择
• 1.3 小鼠体内HSP65-MUC1 代谢情况的检测
• 2. 间接 ELISA 检测 HSP65-MUC1 抗体方法的建立
• 结论
• 参考文献
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 英文缩写词表
• 致谢
• 导师简介
• 作者简介