本文主要研究内容
作者卫思丽（2019）在《类弹性蛋白的设计、制备与性能研究》一文中研究指出：类弹性蛋白(Elastin-Like Polypeptides,ELPs)是一种参照弹性蛋白中高度重复序列、通过基因工程技术构建的由五肽重复序列Val-Pro-Gly-Xaa-Gly(VPGXG)n串联重复而成的多肽,其中Xaa称为客座残基,是除了Pro以外的任意一种氨基酸,Xaa和重复次数n不同,则ELPs不同。ELPs与天然弹性蛋白相似,具有良好的细胞相容性,在体内可降解为天然氨基酸,免疫排斥反应低。当外界温度低于相变温度时,ELPs处于溶解状态,当外界温度高于相变温度(Transition temperature,Tt)时,ELPs自动聚集,从溶液中析出形成沉淀,该特性被称为相转变特性,已被广泛用于组织工程材料、药物靶向递送和蛋白纯化研究。课题组的前期工作已经构建了多种序列组成ELPs,但是其相转变温度较高,用作药物递送载体或组织工程材料的潜力不大,也难以实现廉价的相变循环纯化。因此,本课题的目的是在文献资料基础上,设计、构建、筛选相转变温度较低、生物相容性较好的ELPs,为研制药物靶向递送载体、组织工程材料分子奠定基础。目的:筛选出相变温度接近体温、生物活性较好的ELPs。方法:(1)根据文献报道,重新设计合成氨基酸序列和肽链长度不同的的ELPs;(2)利用RDL技术构建、筛选出符合要求的ELPs原核表达载体(50倍体和90倍体);(3)利用大肠杆菌表达、制备不同ELPs;(4)通过小鼠成纤维细胞L929细胞增殖和迁移分析不同ELPs的活性;(5)在创伤动物模型上分析不同ELPs损伤修复活性。结果:(1)双酶切检测结果显示,不同序列的ELP50s和ELP90s被插入突变的pUC18克隆载体和表达载体pET28a(+)的Nco Ⅰ和Xho Ⅰ位点之间;(2)SDS-PAGE分析检测结果显示,18种不同的ELPs均可在IPTG诱导下以可溶状态在E.coliBL21(DE3)细胞中表达积累;(3)使用ITC法纯化目的蛋白,可获得纯度在90%以上的ELPs重组蛋白;(4)小鼠成纤维细胞L929的增殖及迁移实验结果表明,ELP①-50、ELP⑥-50对小鼠成纤维细胞具有明显的增殖作用,ELP①-50、ELP①-90、ELP④-50、ELP④-90、ELP⑦-50、ELP⑦-90、ELP⑧-50和HLC对小鼠成纤维细胞L929的迁移能够起到明显的促进作用;(5)小鼠皮肤缺损修复实验结果显示,ELP①-50和ELP⑦-90能够明显促进小鼠皮肤缺损的修复,且其1%浓度时的相转变温度分别为40℃和35℃。结论:研究获得了两种相转变温度较低、生物活性较好的ELPs即ELP①-50和ELP⑦-90,为研制靶向药物递送载体和组织工程材料分子奠定了基础。
Abstract
lei dan xing dan bai (Elastin-Like Polypeptides,ELPs)shi yi chong can zhao dan xing dan bai zhong gao du chong fu xu lie 、tong guo ji yin gong cheng ji shu gou jian de you wu tai chong fu xu lie Val-Pro-Gly-Xaa-Gly(VPGXG)nchuan lian chong fu er cheng de duo tai ,ji zhong Xaachen wei ke zuo can ji ,shi chu le Proyi wai de ren yi yi chong an ji suan ,Xaahe chong fu ci shu nbu tong ,ze ELPsbu tong 。ELPsyu tian ran dan xing dan bai xiang shi ,ju you liang hao de xi bao xiang rong xing ,zai ti nei ke jiang jie wei tian ran an ji suan ,mian yi pai chi fan ying di 。dang wai jie wen du di yu xiang bian wen du shi ,ELPschu yu rong jie zhuang tai ,dang wai jie wen du gao yu xiang bian wen du (Transition temperature,Tt)shi ,ELPszi dong ju ji ,cong rong ye zhong xi chu xing cheng chen dian ,gai te xing bei chen wei xiang zhuai bian te xing ,yi bei an fan yong yu zu zhi gong cheng cai liao 、yao wu ba xiang di song he dan bai chun hua yan jiu 。ke ti zu de qian ji gong zuo yi jing gou jian le duo chong xu lie zu cheng ELPs,dan shi ji xiang zhuai bian wen du jiao gao ,yong zuo yao wu di song zai ti huo zu zhi gong cheng cai liao de qian li bu da ,ye nan yi shi xian lian jia de xiang bian xun huan chun hua 。yin ci ,ben ke ti de mu de shi zai wen suo zi liao ji chu shang ,she ji 、gou jian 、shai shua xiang zhuai bian wen du jiao di 、sheng wu xiang rong xing jiao hao de ELPs,wei yan zhi yao wu ba xiang di song zai ti 、zu zhi gong cheng cai liao fen zi dian ding ji chu 。mu de :shai shua chu xiang bian wen du jie jin ti wen 、sheng wu huo xing jiao hao de ELPs。fang fa :(1)gen ju wen suo bao dao ,chong xin she ji ge cheng an ji suan xu lie he tai lian chang du bu tong de de ELPs;(2)li yong RDLji shu gou jian 、shai shua chu fu ge yao qiu de ELPsyuan he biao da zai ti (50bei ti he 90bei ti );(3)li yong da chang gan jun biao da 、zhi bei bu tong ELPs;(4)tong guo xiao shu cheng qian wei xi bao L929xi bao zeng shi he qian yi fen xi bu tong ELPsde huo xing ;(5)zai chuang shang dong wu mo xing shang fen xi bu tong ELPssun shang xiu fu huo xing 。jie guo :(1)shuang mei qie jian ce jie guo xian shi ,bu tong xu lie de ELP50she ELP90sbei cha ru tu bian de pUC18ke long zai ti he biao da zai ti pET28a(+)de Nco Ⅰhe Xho Ⅰwei dian zhi jian ;(2)SDS-PAGEfen xi jian ce jie guo xian shi ,18chong bu tong de ELPsjun ke zai IPTGyou dao xia yi ke rong zhuang tai zai E.coliBL21(DE3)xi bao zhong biao da ji lei ;(3)shi yong ITCfa chun hua mu de dan bai ,ke huo de chun du zai 90%yi shang de ELPschong zu dan bai ;(4)xiao shu cheng qian wei xi bao L929de zeng shi ji qian yi shi yan jie guo biao ming ,ELP①-50、ELP⑥-50dui xiao shu cheng qian wei xi bao ju you ming xian de zeng shi zuo yong ,ELP①-50、ELP①-90、ELP④-50、ELP④-90、ELP⑦-50、ELP⑦-90、ELP⑧-50he HLCdui xiao shu cheng qian wei xi bao L929de qian yi neng gou qi dao ming xian de cu jin zuo yong ;(5)xiao shu pi fu que sun xiu fu shi yan jie guo xian shi ,ELP①-50he ELP⑦-90neng gou ming xian cu jin xiao shu pi fu que sun de xiu fu ,ju ji 1%nong du shi de xiang zhuai bian wen du fen bie wei 40℃he 35℃。jie lun :yan jiu huo de le liang chong xiang zhuai bian wen du jiao di 、sheng wu huo xing jiao hao de ELPsji ELP①-50he ELP⑦-90,wei yan zhi ba xiang yao wu di song zai ti he zu zhi gong cheng cai liao fen zi dian ding le ji chu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自西北大学的卫思丽，发表于刊物西北大学2019-10-08论文，是一篇关于类弹性蛋白论文,设计论文,表达纯化论文,相变温度论文,性能研究论文,西北大学2019-10-08论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自西北大学2019-10-08论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。