论文摘要
第一部分晚期乳腺癌患者外周血中Survivin的表达与预后的相关性研究目的：1．阐明乳腺癌患者外周血与瘤组织中Survivin表达的关系。2．阐明外周血中Survivin表达与疗效及预后的关系。3．阐明外周血Survivin表达与ER、PR及Her-2／neu表达的关系，寻找能有效预测疗效及预后的“标记物群”。方法：1．RT-PCR法半定量检测外周血中SurvivinmRNA的表达。2．Real-timePCR法定量检测外周血中SurvivinmRNA的含量。3．免疫组化法半定量检测石蜡切片中Survivin、Her-2蛋白的表达。4．分析15例乳腺癌患者的临床因素：年龄、病理类型、临床分期、生存期及疗效。5．根据临床及实验室检测结果进行数据分析及处理。结果：1．15例患者中Survivin阳性表达率为10／15（66.7％），外周血mRNA表达与蛋白表达一致。2．15例应用TP方案化疗的患者的疾病控制率为11／15（73.3％），4例疗效评价为PD的患者均为SurvivinmRNA阳性表达且化疗后SurvivinmRNA表达增高。3．Her-2的阳性率为6／15（40.0％），ER／PR的阳性率为8／15（53.3％），外周血SurvivinmRNA与Her-2、ER／PR的表达可能相关。结论：1．相关性检验显示外周血中Survivin的检测创伤小且与组织中Survivin的阳性率一致，并且与ER／PR及Her-2的表达也有一定相关性，有可能成为预测疗效及预后的“标记物群”；2．多西紫杉醇联合DDP治疗晚期乳腺癌是一疗效较好的方案，Survivin的表达与乳腺癌对TP方案化疗的敏感性有一定相关性，且可能关系到患者的预后；3．本课题涉及的患者例数较少，实验结果具有一定的参考价值，同时为临床工作提供一种新方法，尚需进一步大宗病例的纳入来验证本课题的结论。第二部分恩度联合多西紫杉醇对SK-BR-3细胞的抑制作用及相关机制研究研究背景：恩度TM是中国南京先声药业股份公司开发的新型重组人血管内皮抑素（rh-endostatin），临床前研究结果显示该药能抑制血管内皮细胞增殖、血管生成和肿瘤生长。最近已经有个别研究报告除了抗血管生成活性，内皮抑素还可直接抑制某些肿瘤细胞系（如结肠癌）的生长，我们的前期实验也初步揭示了恩度可以直接诱导肺癌细胞调亡。但其作用机制的细节目前尚不十分清楚。目的：1观察恩度与多西紫杉醇对乳腺癌细胞的生长抑制作用，探讨恩度是否能够诱导乳腺癌细胞凋亡及相关的凋亡信号通路。2观察恩度与多西紫杉醇的联合是否具有协同作用，如果有，则进一步探讨联合用药的时间、剂量关系及可能的相关机制，指导临床联合用药。方法：1 MTr测定药物对SK-BR-3细胞的抑制率；2流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期；3 ELISA检测凋亡相关蛋白的表达。结果：恩度对乳腺癌SK-BR-3细胞的抑制作用具有明显的时间依赖性，与剂量无明显关系，恩度1μg／ml作用72h的抑制率为30.1％，凋亡率为11.62％，细胞周期无明显改变；sFas／sFasL均未见表达。恩度。1μg／ml作用72h可见Bcl-2的下调（16.64％vs 10.32％）而Bax的表达无明显改变（2.65％vs 2.53％）。多西紫杉醇对乳腺癌SK-BR-3细胞的抑制作用具有明显的时间和剂量依赖性，多西紫杉醇作用SK-BR-3细胞24h的IC50为2.09μg／ml；2μg／ml作用24h细胞抑制率为39.40％，凋亡率为12.40％，G2／M期比例明显增高（56.12％vs 23.71％）。sFas／sFasL亦未见表达，多西紫杉醇2μg／ml作用72h亦可见Bcl-2的下调（16.64％％vs 12.71％）而Bax的表达轻微升高（2.65％vs 3.24％）。多西紫杉醇与恩度同时给药方案表现出明显的协同作用，而序贯给药的抑制率较多西紫杉醇单药无明显升高，二者同时给药诱导凋亡的作用最强，与单药比较，二者同时给药的下调Bcl-2作用明显增强。结论：恩度与多西紫杉醇均能够诱导抑制乳腺癌SK-BR-3细胞的生长，诱导细胞凋亡，同时给药效果最佳，其协同作用与Bcl-2下调可能相关。