脑灵汤对阿尔茨海默病模型大鼠海马CA3区域GSK-3β与P-CREB表达的影响

论文摘要

目的:观察脑灵汤对阿尔茨海默病模型大鼠行为学、海马组织形态学、海马CA3区GSK-3β和P-CREB蛋白表达的影响,初步探讨脑灵汤对AD模型大鼠的治疗作用及其可能的作用机制。方法:将经Y型迷宫测试筛选后入选的40只SD大鼠完全随机分为正常组、假手术组、模型组、中药组和西药组。采用Aβ1-42注射大鼠海马制作AD大鼠模型,Y迷宫试验和Morris水迷宫测定大鼠造模后三周的学习记忆成绩,取脑组织作冰冻切片,刚果红染色观察大鼠海马是否有β-淀粉样蛋白的沉积,HE染色、Nissl染色观察大鼠海马组织形态学改变。免疫组化法观察GSK-3β和P-CREB在大鼠海马CA3区组织神经元中的表达。结果:（1）Y迷宫实验中,与假手术组和正常组比较,模型组大鼠学会躲避所需的电刺激次数明显增多（p＜0.05）,与模型组比较,经药物干预后,中药、西药两治疗组大鼠表现为所需的电刺激次数减少（p＜0.05）,且两治疗组相比无显著性差异。（2）Morris水迷宫隐匿平台搜索实验中,与假手术组和正常组比较,模型组大鼠表现为逃避潜伏期明显延长（p＜0.05）;探索实验中,正常组和假手术组动物的平均穿越次数最多,中药组和西药组动物穿越次数又多于模型组,比较有显著差异（p＜0.05）。（3）刚果红染色:光镜下,正常组、假手术组大鼠海马切片未见橘红色淀粉样沉积,海马背侧细胞带排列整齐。模型组大鼠Aβ1-42注射部位的海马切片上可见橘红色斑块状淀粉样沉积,提示海马组织区有Aβ沉淀,且模型组海马背侧细胞带明显损伤,局部神经元大段缺失,并出现胶质细胞反应。（4）光镜观察显示,假手术组和正常组大鼠海马CA3区锥体细胞排列紧密整齐,无明显神经元脱失;模型组大鼠海马CA3区锥体细胞排列稀疏、紊乱,神经元脱失明显,且正常锥体细胞数目较正常组和假手术组比较明显减少（p＜0.05）;中、西药治疗组大鼠海马CA3区神经元脱失现象明显减轻,锥体细胞形态较正常,排列较整齐,接近假手术组。（5）GSK-3β免疫组化结果显示,各组大鼠海CA3区域GSK-3β阳性细胞数比较,模型组最多,中药组和西药组高于正常组和假手术组（p＜0.05）,具有统计学意义。灰度值比较结果显示,模型组显著高于正常组与假手术组,而中药组与西药组低于模型组（P＜0.05）,具有统计学意义。（6）P-CREB免疫组化结果显示,各组大鼠海马CA3区P-CREB阳性细胞数比较,模型组最少,中药组和西药组低于正常组和假手术组（p＜0.05）,具有统计学意义。各组大鼠海马CA3区P-CREB灰度值比较,模型组显著低于假手术组和正常组（p＜0.05）;中药组和西药组大鼠海马CA3区P-CREB灰度值较模型组显著增加（p＜0.05）。结论:（1）本实验研究结果表明采用Aβ1-42注射大鼠海马制作AD模型大鼠出现了AD的一些行为学及病理改变,说明该模型的建立是成功的。（2）AD模型大鼠学习记忆能力明显下降,脑灵汤能提高模型大鼠的学习记忆能力。（3）脑灵汤能减轻AD大鼠海马CA3区神经元脱失现象,改善AD大鼠海马锥体细胞形态,对AD大鼠有治疗作用。（4）脑灵汤可降低AD大鼠海马CA3区GSK-3β的表达,提高P-CREB水平,这些可能是脑灵汤治疗阿尔茨海默病的部分作用机制。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 符号说明
• 前言
• 第一章 脑灵汤对AD模型大鼠行为学的影响
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 附图
• 第二章 脑灵汤对AD模型大鼠海马组织形态学的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 附图
• 第三章 脑灵汤对AD模型大鼠海马CA3区GSK-3β与P-CREB表达的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 附图
• 第四章 讨论
• 一、β淀粉样蛋白（β-Amyloid Protein）与AD的关系
• 二、AD目前治疗
• 三、AD模型的建立及可靠性的研究
• 四、关于AD模型大鼠的行为学测试
• 五、关于AD模型大鼠海马的镜下形态学
• 六、老年性痴呆与Aβ、GSK-3β、β-CREB关系及相互间作用
• 七、脑灵汤对治疗AD的认识
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 在研期间科研及获奖情况