小菜蛾对溴氰菊酯、杀螟丹、杀虫双三种杀虫剂抗性相关序列的克隆与分析

论文摘要

小菜蛾属鳞翅目菜蛾科,是世界性十子花科植物主要害虫。目前对小菜蛾的防治已成为世界性难题。小菜蛾对几乎所有的杀虫剂都产生了抗药性。它的抗性机理非常复杂,主要包括杀虫剂对昆虫表皮穿透性的降低、昆虫体内代谢酶代谢功能的增强和杀虫剂靶标不敏感性等。不同杀虫剂的作用机理不同,但是归根到底都是相关基因作用的结果。所以我们认为比较和分析敏感品系和抗性品系基因组的差异对研究小菜蛾的抗性遗传机理是大有必要的。 本文以敏感品系、抗杀虫双品系、抗杀螟丹品系和抗溴氰菊酯品系小菜蛾为实验材料,采用代表性差异分析方法分析了三种抗性品系与敏感品系小菜蛾在基因组上的差异,并且对得到的部分差异序列做了初步的分析。主要的初步结果如下: 1.在抗溴氰菊酯品系小菜蛾中得到了分子量约为200bp-300bp左右的差异条带,在抗杀螟丹和抗杀虫双品系中获得分子量约250bp的差异条带。 2.对上述差异条带分别进行回收和克隆,在每个抗性品系中随机挑选20个阳性克隆进行测序,所得序列在NCBI上用BLAST做分析。 3.在抗溴氰菊酯品系小菜蛾的分析中,我们得到一条与细胞色素P450相关的序列Di8;在抗杀虫双品系小菜蛾的分析中,我们得到了S109、S106、S104三条序列:S106与钾离子通道相关,S109与氯离子通道相关,S104与黑腹果蝇成虫精巢的一条cDNA序列有相当高的同源性;在抗杀螟丹品系小菜蛾中,我们目前没有得到同源性较高的序列。 4.对于Di8序列,它与细胞色素P450相关。细胞色素P450与抗药性相关目前已得到公认;S106序列与钾离子通道序列相关,S109序列与氯离子通道序列相关,说明它们可能与小菜蛾的神经系统有关。而沙蚕毒素类杀虫剂作用于小菜蛾的神经系统。它们的改变可能会影响到沙蚕毒素的作用效果;S104序列则可能与小菜蛾的生殖方面相关,目前认为抗药性的不稳定性与抗性小菜蛾的繁殖率降低有关。 由于小菜蛾的基因组未知,抗药性机理非常复杂,因此本研究筛选到的几个差异序列与抗药性的关系尚需进一步研究。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 第一章、小菜蛾抗药性的研究概况
• 1 小菜蛾抗药性的发展状况
• 2 小菜蛾抗药性的遗传方式
• 3 小菜蛾抗药性的机理
• 4 小菜蛾抗药性的治理
• 第二章、实验材料的培育与基因组DNA的提取
• 1 小菜蛾的培育
• 2 小菜蛾基因组的提取
• 第三章、小菜蛾抗药性的RDA分析
• 1 材料与方法
• 2 实验结果和讨论
• 第四章、差异序列的克隆与测序分析
• 1 代表性差异分析序列的克隆与测序
• 2 代表性差异分析序列的分析
• 3 讨论
• 参考文献
• 致谢