本文主要研究内容
作者周文豪（2019）在《蛋白激酶AMPK在团头鲂脂肪肝发生中的作用及羟基酪醇对脂肪代谢的调控》一文中研究指出：近年来,高密度、集约化水产养殖模式的推广,导致鱼类营养性脂肪肝频繁发生,已成为制约水产养殖业健康发展的重要因素。饲料营养不均衡,过饱食投喂等原因均会引起鱼类脂肪肝的发生,进而导致病鱼生长缓慢、饲料利用率降低、抗病和抗应激能力减弱等。目前,对脂肪肝的发生机制仍缺乏足够的了解,因此,探究鱼类脂肪肝的发生机制并寻求可能的防治方法具有重要意义。本试验以团头鲂为研究对象,建立原代肝细胞脂肪沉积模型,对脂肪代谢与沉积机制进行研究,并在体内外试验研究羟基酪醇对脂肪肝的缓解作用。试验内容包括四部分:(1)团头鲂肝细胞原代培养方法的建立本试验旨在建立一种稳定可靠的团头鲂肝细胞原代培养方法。首先,采用室温胰酶消化法进行肝细胞分离,并使用percoll分离液结合密度梯度离心法纯化肝细胞;细胞在含15%FBS的L-15培养基中重悬,然后台盼蓝染色法测定细胞活力及浓度;最后于恒温箱培养并定期观察;在培养24、48、72h后,分别测定上清中的AST、ALT及LDH活性;以分析细胞生长状态。结果表明,分离纯化后的肝细胞活力值达90%以上;显微镜观察发现,培养48h肝细胞紧密连接呈岛状且形态趋于稳定;上清中的AST、ALT及LDH活性在24h时最高,随着培养时间的延长逐渐降低(P<0.05),48h与72h间无显著差异。综上,采用胰蛋白酶室温消化法所得肝细胞,于恒温细胞培养箱培养48h后,得到生长旺盛、生理状态稳定的原代肝细胞。(2)团头鲂原代肝细胞脂肪沉积模型的建立采用油酸诱导的方法建立肝细胞脂肪沉积模型,为研究肝细胞脂肪沉积机制提供试验材料。用含不同浓度油酸(0、0.2、0.4、0.8 mM)的培养基诱导培养团头鲂原代肝细胞,并分别测定细胞内甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)含量,谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)活性以及细胞存活率,确定适宜的油酸浓度。结果显示,0.4 mM油酸诱导培养肝细胞48h后,肝细胞内TG和TC含量以及上清液AST、ALT与LDH活性均显著增加(P<0.05),细胞内出现明显的脂滴,且此时肝细胞存活率较高。综上所述,用含0.4 mM油酸的培养基培养团头鲂原代肝细胞48h,可诱导肝细胞内脂肪显著沉积。(3)蛋白激酶AMPK在团头鲂肝细胞脂肪代谢中的作用以团头鲂原代肝细胞脂肪沉积模型为研究对象,旨在探究AMPK在团头鲂肝细胞脂肪代谢中的作用。试验设三个处理组,对照组(15%FBS的L-15培养基孵育)、油酸组(含0.4mM油酸的15%FBS的L-15培养基孵育)、AMPK激活组(200μM二甲双胍与含0.4 mM油酸的15%FBS的L-15培养基共孵育),不同培养基培养肝细胞48h后,收集细胞和上清液用于分析。结果显示,油酸组细胞甘油三酯和总胆固醇浓度显著增加,AMPK激活组则显著低于油酸组(P<0.05)。此外,与对照组和AMPK激活组相比,油酸组上清液中AST、ALT和LDH的活性最高;油酸组AMPK和磷酸化AMPK的蛋白表达水平最低,二甲双胍则可显著上调它们的表达(P<0.05);油酸组PPAR-α、CPTI、AOX和TFAM等脂肪分解相关基因的表达被下调,二甲双胍则可显著上调其表达(P<0.05);油酸组FAS和SREBP-1C基因的表达显著下调,二甲双胍可进一步下调其表达(P<0.05),而ACC2在油酸组的表达要显著高于对照组和AMPK激活组(P<0.05);油酸组线粒体复合物(Ⅰ-Ⅲ)的活性最低,而二甲双胍显著改善粒体复合物(Ⅰ-Ⅲ)的活性(P<0.05);且促进线粒体的生物发生。此外,油酸组的活性氧和丙二醛浓度显著增加,添加二甲双胍显著降低二者浓度,还能提高谷胱甘肽过氧化物酶活性(P<0.05)。结果表明,二甲双胍能够激活团头鲂肝细胞中的AMPK,增强脂肪分解代谢、降低合成代谢,改善线粒体功能及细胞的氧化还原状态,最终显著缓解肝细胞中的脂肪沉积。(4)羟基酪醇在团头鲂肝脏脂肪代谢中的作用为探究羟基酪醇对团头鲂肝脏脂肪代谢的调控作用,本部分研究先后在细胞试验和养殖试验中开展:细胞试验:共包括三个处理,对照组(15%FBS的L-15培养基)、油酸组(含0.4 mM油酸的15%FBS的L-15培养基孵育)、羟基酪醇组(10 mM羟基酪醇与含0.4 mM油酸的15%FBS的L-15培养基共孵育);处理48h后,收集细胞和上清液用于分析。结果表明,羟基酪醇显著降低了肝细胞甘油三酯和总胆固醇浓度,并减少肝细胞中的脂滴数量;羟基酪醇还可以降低上清液中AST、ALT和LDH的活性,缓解肝细胞损伤(P<0.05)。此外,羟基酪醇能够上调脂肪分解相关基因PPAR-α、CPTI及AOX的表达,下调脂质合成相关基因ACC2、FAS及SREBP-1c的表达;同时羟基酪醇还能够上调线粒体相关基因PGC-1α、NRF1、TFAM、UCP2和UCP4的表达,并提高线粒体生成的功能(P<0.05);而且,羟基酪醇能显著提升线粒体呼吸链复合物(Ⅰ-Ⅲ)及琥珀酸脱氢酶的活性,改善线粒体膜电位水平(P<0.05);羟基酪醇还能降低肝细胞中活性氧和丙二醛的含量,提高谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶的活性(P<0.05)。养殖试验:共包括四组,5%脂肪组(L5)、5%脂肪添加200 mg/Kg羟基酪醇组(L5/HT)、15%脂肪组(L15)、15%脂肪添加200 mg/Kg羟基酪醇组(L15/HT);10周养殖试验结束后,采集样品用于分析。结果显示,低脂水平下添加羟基酪醇对团头鲂的生长性能无显著影响,但会降低团头鲂的增重率;而高脂水平下添加羟基酪醇则可显著改善团头鲂的存活率、特定生长率以及蛋白沉积率,并显著增加其增重率(P<0.05)。此外,无论低脂还是高脂水平下添加羟基酪醇,均可上调脂肪分解相关基因PPAR-α、CPTI、AOX以及线粒体相关基因PGC-1α、NRF1、TFAM、UCP2和UCP4的表达,并促进线粒体生成,降低肝脏脂肪含量(P<0.05)。低脂水平下添加羟基酪醇对脂肪合成相关基因ACC2、FAS及SREBP-1c的表达无显著影响(P>0.05),但会显著抑制PPAR-γ的表达(P<0.05);而高脂水平下添加羟基酪醇,脂肪合成相关基因ACC2、FAS、SREBP-1c及PPAR-γ的表达皆显著下调(P<0.05)。同时,羟基酪醇还可以提高线粒体呼吸链复合物(Ⅰ-Ⅴ)的活性,其中仅L15/HT组中的线粒体呼吸链复合物Ⅳ的活性增加无统计学差异外(P>0.05)。综合细胞和养殖试验,HT可以上调脂肪分解相关基因,并增强线粒体的功能,从而缓解肝细胞内的脂肪沉积。
Abstract
jin nian lai ,gao mi du 、ji yao hua shui chan yang shi mo shi de tui an ,dao zhi yu lei ying yang xing zhi fang gan pin fan fa sheng ,yi cheng wei zhi yao shui chan yang shi ye jian kang fa zhan de chong yao yin su 。si liao ying yang bu jun heng ,guo bao shi tou wei deng yuan yin jun hui yin qi yu lei zhi fang gan de fa sheng ,jin er dao zhi bing yu sheng chang huan man 、si liao li yong lv jiang di 、kang bing he kang ying ji neng li jian ruo deng 。mu qian ,dui zhi fang gan de fa sheng ji zhi reng que fa zu gou de le jie ,yin ci ,tan jiu yu lei zhi fang gan de fa sheng ji zhi bing xun qiu ke neng de fang zhi fang fa ju you chong yao yi yi 。ben shi yan yi tuan tou fang wei yan jiu dui xiang ,jian li yuan dai gan xi bao zhi fang chen ji mo xing ,dui zhi fang dai xie yu chen ji ji zhi jin hang yan jiu ,bing zai ti nei wai shi yan yan jiu qiang ji lao chun dui zhi fang gan de huan jie zuo yong 。shi yan nei rong bao gua si bu fen :(1)tuan tou fang gan xi bao yuan dai pei yang fang fa de jian li ben shi yan zhi zai jian li yi chong wen ding ke kao de tuan tou fang gan xi bao yuan dai pei yang fang fa 。shou xian ,cai yong shi wen yi mei xiao hua fa jin hang gan xi bao fen li ,bing shi yong percollfen li ye jie ge mi du ti du li xin fa chun hua gan xi bao ;xi bao zai han 15%FBSde L-15pei yang ji zhong chong xuan ,ran hou tai pan lan ran se fa ce ding xi bao huo li ji nong du ;zui hou yu heng wen xiang pei yang bing ding ji guan cha ;zai pei yang 24、48、72hhou ,fen bie ce ding shang qing zhong de AST、ALTji LDHhuo xing ;yi fen xi xi bao sheng chang zhuang tai 。jie guo biao ming ,fen li chun hua hou de gan xi bao huo li zhi da 90%yi shang ;xian wei jing guan cha fa xian ,pei yang 48hgan xi bao jin mi lian jie cheng dao zhuang ju xing tai qu yu wen ding ;shang qing zhong de AST、ALTji LDHhuo xing zai 24hshi zui gao ,sui zhao pei yang shi jian de yan chang zhu jian jiang di (P<0.05),48hyu 72hjian mo xian zhe cha yi 。zeng shang ,cai yong yi dan bai mei shi wen xiao hua fa suo de gan xi bao ,yu heng wen xi bao pei yang xiang pei yang 48hhou ,de dao sheng chang wang cheng 、sheng li zhuang tai wen ding de yuan dai gan xi bao 。(2)tuan tou fang yuan dai gan xi bao zhi fang chen ji mo xing de jian li cai yong you suan you dao de fang fa jian li gan xi bao zhi fang chen ji mo xing ,wei yan jiu gan xi bao zhi fang chen ji ji zhi di gong shi yan cai liao 。yong han bu tong nong du you suan (0、0.2、0.4、0.8 mM)de pei yang ji you dao pei yang tuan tou fang yuan dai gan xi bao ,bing fen bie ce ding xi bao nei gan you san zhi (TG)he zong dan gu chun (TC)han liang ,gu cao zhuai an mei (AST)、gu bing zhuai an mei (ALT)、ru suan tuo qing mei (LDH)huo xing yi ji xi bao cun huo lv ,que ding kuo yi de you suan nong du 。jie guo xian shi ,0.4 mMyou suan you dao pei yang gan xi bao 48hhou ,gan xi bao nei TGhe TChan liang yi ji shang qing ye AST、ALTyu LDHhuo xing jun xian zhe zeng jia (P<0.05),xi bao nei chu xian ming xian de zhi di ,ju ci shi gan xi bao cun huo lv jiao gao 。zeng shang suo shu ,yong han 0.4 mMyou suan de pei yang ji pei yang tuan tou fang yuan dai gan xi bao 48h,ke you dao gan xi bao nei zhi fang xian zhe chen ji 。(3)dan bai ji mei AMPKzai tuan tou fang gan xi bao zhi fang dai xie zhong de zuo yong yi tuan tou fang yuan dai gan xi bao zhi fang chen ji mo xing wei yan jiu dui xiang ,zhi zai tan jiu AMPKzai tuan tou fang gan xi bao zhi fang dai xie zhong de zuo yong 。shi yan she san ge chu li zu ,dui zhao zu (15%FBSde L-15pei yang ji fu yo )、you suan zu (han 0.4mMyou suan de 15%FBSde L-15pei yang ji fu yo )、AMPKji huo zu (200μMer jia shuang gua yu han 0.4 mMyou suan de 15%FBSde L-15pei yang ji gong fu yo ),bu tong pei yang ji pei yang gan xi bao 48hhou ,shou ji xi bao he shang qing ye yong yu fen xi 。jie guo xian shi ,you suan zu xi bao gan you san zhi he zong dan gu chun nong du xian zhe zeng jia ,AMPKji huo zu ze xian zhe di yu you suan zu (P<0.05)。ci wai ,yu dui zhao zu he AMPKji huo zu xiang bi ,you suan zu shang qing ye zhong AST、ALThe LDHde huo xing zui gao ;you suan zu AMPKhe lin suan hua AMPKde dan bai biao da shui ping zui di ,er jia shuang gua ze ke xian zhe shang diao ta men de biao da (P<0.05);you suan zu PPAR-α、CPTI、AOXhe TFAMdeng zhi fang fen jie xiang guan ji yin de biao da bei xia diao ,er jia shuang gua ze ke xian zhe shang diao ji biao da (P<0.05);you suan zu FAShe SREBP-1Cji yin de biao da xian zhe xia diao ,er jia shuang gua ke jin yi bu xia diao ji biao da (P<0.05),er ACC2zai you suan zu de biao da yao xian zhe gao yu dui zhao zu he AMPKji huo zu (P<0.05);you suan zu xian li ti fu ge wu (Ⅰ-Ⅲ)de huo xing zui di ,er er jia shuang gua xian zhe gai shan li ti fu ge wu (Ⅰ-Ⅲ)de huo xing (P<0.05);ju cu jin xian li ti de sheng wu fa sheng 。ci wai ,you suan zu de huo xing yang he bing er quan nong du xian zhe zeng jia ,tian jia er jia shuang gua xian zhe jiang di er zhe nong du ,hai neng di gao gu guang gan tai guo yang hua wu mei huo xing (P<0.05)。jie guo biao ming ,er jia shuang gua neng gou ji huo tuan tou fang gan xi bao zhong de AMPK,zeng jiang zhi fang fen jie dai xie 、jiang di ge cheng dai xie ,gai shan xian li ti gong neng ji xi bao de yang hua hai yuan zhuang tai ,zui zhong xian zhe huan jie gan xi bao zhong de zhi fang chen ji 。(4)qiang ji lao chun zai tuan tou fang gan zang zhi fang dai xie zhong de zuo yong wei tan jiu qiang ji lao chun dui tuan tou fang gan zang zhi fang dai xie de diao kong zuo yong ,ben bu fen yan jiu xian hou zai xi bao shi yan he yang shi shi yan zhong kai zhan :xi bao shi yan :gong bao gua san ge chu li ,dui zhao zu (15%FBSde L-15pei yang ji )、you suan zu (han 0.4 mMyou suan de 15%FBSde L-15pei yang ji fu yo )、qiang ji lao chun zu (10 mMqiang ji lao chun yu han 0.4 mMyou suan de 15%FBSde L-15pei yang ji gong fu yo );chu li 48hhou ,shou ji xi bao he shang qing ye yong yu fen xi 。jie guo biao ming ,qiang ji lao chun xian zhe jiang di le gan xi bao gan you san zhi he zong dan gu chun nong du ,bing jian shao gan xi bao zhong de zhi di shu liang ;qiang ji lao chun hai ke yi jiang di shang qing ye zhong AST、ALThe LDHde huo xing ,huan jie gan xi bao sun shang (P<0.05)。ci wai ,qiang ji lao chun neng gou shang diao zhi fang fen jie xiang guan ji yin PPAR-α、CPTIji AOXde biao da ,xia diao zhi zhi ge cheng xiang guan ji yin ACC2、FASji SREBP-1cde biao da ;tong shi qiang ji lao chun hai neng gou shang diao xian li ti xiang guan ji yin PGC-1α、NRF1、TFAM、UCP2he UCP4de biao da ,bing di gao xian li ti sheng cheng de gong neng (P<0.05);er ju ,qiang ji lao chun neng xian zhe di sheng xian li ti hu xi lian fu ge wu (Ⅰ-Ⅲ)ji hu po suan tuo qing mei de huo xing ,gai shan xian li ti mo dian wei shui ping (P<0.05);qiang ji lao chun hai neng jiang di gan xi bao zhong huo xing yang he bing er quan de han liang ,di gao gu guang gan tai guo yang hua wu mei he chao yang hua wu qi hua mei de huo xing (P<0.05)。yang shi shi yan :gong bao gua si zu ,5%zhi fang zu (L5)、5%zhi fang tian jia 200 mg/Kgqiang ji lao chun zu (L5/HT)、15%zhi fang zu (L15)、15%zhi fang tian jia 200 mg/Kgqiang ji lao chun zu (L15/HT);10zhou yang shi shi yan jie shu hou ,cai ji yang pin yong yu fen xi 。jie guo xian shi ,di zhi shui ping xia tian jia qiang ji lao chun dui tuan tou fang de sheng chang xing neng mo xian zhe ying xiang ,dan hui jiang di tuan tou fang de zeng chong lv ;er gao zhi shui ping xia tian jia qiang ji lao chun ze ke xian zhe gai shan tuan tou fang de cun huo lv 、te ding sheng chang lv yi ji dan bai chen ji lv ,bing xian zhe zeng jia ji zeng chong lv (P<0.05)。ci wai ,mo lun di zhi hai shi gao zhi shui ping xia tian jia qiang ji lao chun ,jun ke shang diao zhi fang fen jie xiang guan ji yin PPAR-α、CPTI、AOXyi ji xian li ti xiang guan ji yin PGC-1α、NRF1、TFAM、UCP2he UCP4de biao da ,bing cu jin xian li ti sheng cheng ,jiang di gan zang zhi fang han liang (P<0.05)。di zhi shui ping xia tian jia qiang ji lao chun dui zhi fang ge cheng xiang guan ji yin ACC2、FASji SREBP-1cde biao da mo xian zhe ying xiang (P>0.05),dan hui xian zhe yi zhi PPAR-γde biao da (P<0.05);er gao zhi shui ping xia tian jia qiang ji lao chun ,zhi fang ge cheng xiang guan ji yin ACC2、FAS、SREBP-1cji PPAR-γde biao da jie xian zhe xia diao (P<0.05)。tong shi ,qiang ji lao chun hai ke yi di gao xian li ti hu xi lian fu ge wu (Ⅰ-Ⅴ)de huo xing ,ji zhong jin L15/HTzu zhong de xian li ti hu xi lian fu ge wu Ⅳde huo xing zeng jia mo tong ji xue cha yi wai (P>0.05)。zeng ge xi bao he yang shi shi yan ,HTke yi shang diao zhi fang fen jie xiang guan ji yin ,bing zeng jiang xian li ti de gong neng ,cong er huan jie gan xi bao nei de zhi fang chen ji 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自集美大学的周文豪，发表于刊物集美大学2019-07-12论文，是一篇关于团头鲂论文,脂肪沉积论文,脂肪代谢论文,羟基酪醇论文,集美大学2019-07-12论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自集美大学2019-07-12论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：团头鲂论文; 脂肪沉积论文; 脂肪代谢论文; 羟基酪醇论文; 集美大学2019-07-12论文;