羊驼催乳素基因克隆及序列分析

论文摘要

羊驼是我国新引入的一种新畜种,它独特的经济效益,社会效益和环境效益引起了社会各界的广泛关注。然而,羊驼繁殖力低的特点成了其大规模发展的一个制约因素,所以解决这个问题也就成了学术界的一个焦点,其中生殖激素的研究也就成了这个焦点中的一个重点。催乳素是催乳素家族成员之一,它是一种主要由垂体前叶分泌的多肽类激素。自从它被人们从牛的垂体中提取并证明具有生长和促进泌乳功能以来,已相继发现其具有300种以上的生物学功能。本实验主要研究了羊驼催乳素的部分分子生物学内容,旨在对羊驼的催乳素基因进行初步探索和揭示。实验从GENEBANK中已报到的脊椎动物PRL基因保守区设计一对引物,采用氯仿/异戊醇法提取羊驼组DNA和Trizol法提取羊驼胎盘总RNA,利用聚合酶链式反应（PCR）和反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术分别扩增出单一片段。用自制试剂纯化这两个片段并进行测序,结果大小为1100bp和510bp,在NCBI工作平台中进行BLAST后发现与PRL基因高度一致,因此,认为所得到的片段属于羊驼PRL基因。与其它哺乳类动物已知PRL核苷酸序列进行同源性比较,同源性最高可达97%。本试验首次成功扩增了羊驼催乳素基因片断,为以后进一步研究羊驼催乳素基因全序列以及其的提取与纯化奠定了基础。

论文目录

• 摘要
• 前言
• 1 催乳素生物学作用和本实验研究的意义
• 1.1 催乳素的发现和命名
• 1.2 催乳素生物学作用
• 2 催乳素产生部位
• 3 催乳素分子生物学研究进展
• 3.1 催乳素及其基因的一般结构和种间特异性
• 3.2 催乳素的变体结构
• 3.3 羊驼催乳素分子生物学研究进展
• 4 本实验的意义和解决的问题
• 4.1 本实验研究的意义
• 4.2 本实验解决的问题
• 材料和方法
• 1 材料
• 2 试剂与配制
• 2.1 试剂
• 2.2 试剂的配制
• 3 仪器
• 4 方法
• 4.1 羊驼胎盘基因组DNA的提取过程
• 4.2 PCR过程
• 4.3 羊驼胎盘总RNA的提取及完整性与纯度的检测
• 4.4 RT-PCR过程
• 4.5 PCR和RT-PCR产物的纯化
• 4.6 测序
• 4.7 催乳素基因序列分析
• 结果与分析
• 1 基因组DNA
• 2 PCR产物
• 3 PCR产物纯化后检测（图3）
• 4 RNA及RNA完整性检测（图4）
• 5 RT-PCR产物
• 6 测序结果与编码氨基酸
• 7 不同动物催乳素基因序列比对
• 讨论
• 1 哺乳动物催乳素研究情况
• 2 核酸序列和氨基酸序列分析
• 3 同源性比较
• 结论
• 参考文献
• 英文摘要
• 附录1
• 附录2
• 致谢