农杆菌介导pac1基因转化烟草的研究

论文摘要

本研究以烟草叶片为外植体,利用农杆菌介导法首次将pac1基因转入吉林省主栽烟草品种吉烟9号、龙江911-21和云烟87,以期获得抗多种病毒病转基因烟草品系。经过卡那霉素抗性筛选,初步获得吉烟9号转化植株43株,龙江911-21转化植株61株,云烟87转化植株43株。利用CTAB法提取转化植株的总基因组DNA为模板,进行PCR检测。转化烟草吉烟9号的PCR阳性率为21/43,龙江911-21的PCR阳性率为32/61,云烟87的PCR阳性率为24/43。经PCR检测为阳性的植株,均能扩增出与目的片断大小一致的特异性条带,初步表明pac1基因已经转到这些烟草基因组中。为了进一步确定外源基因在转基因植株基因组中的整合情况,从PCR扩增稳定的转基因烟草中随机抽取四株,同时以非转基因烟草为对照,进行SouthernBlot分析,结果表明目的基因pac1已经被成功地整合到烟草基因组中。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 引言
• 1 烟草抗病毒基因工程策略
• 1.1 蛋白质介导的烟草抗病毒基因工程
• 1.1.1 外壳蛋白（Coat Protein,CP）基因
• 1.1.2 运动蛋白（Movement Protein,MP）基因
• 1.1.3 复制酶（Replicase）基因
• 1.1.4 核糖体失活蛋白基因
• 1.2 RNA介导的烟草抗病毒基因工程
• 1.2.1 利用病毒反义RNA（AntisenseRNA）介导病毒抗性
• 1.2.2 非翻译蛋白介导的抗性
• 1.2.3 病毒卫星RNA（Satellite RNA）介导的抗性
• 1.2.4 利用弱病毒株系的基因组介导的抗性
• 1.3 其它烟草抗病毒基因工程策略
• 1.3.1 植物抗体基因
• 1.3.2 双链RNA分解酶介导的抗性
• 1.4 本研究的目的和意义
• 第二章 农杆菌介导法将pac1基因转化烟草的研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 供试植物
• 1.1.2 菌种和质粒
• 1.1.3 常用缓冲液的配制
• 1.1.4 药品试剂
• 1.1.5 仪器设备
• 1.2 方法
• 1.2.1 烟草转化植株的获得
• 2 结果与分析
• 2.1 烟草的转化和卡那抗性植株的获得
• 第三章 转基因烟草的分子检测
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 检测试剂
• 1.1.2 PCR引物
• 1.1.3 仪器
• 1.2 方法
• 1.2.1 PCR检测
• 1.2.2 Southern Blot
• 2 结果与分析
• 2.1 转基因烟草植株的PCR检测
• 2.2 转基因烟草的Southern Blot
• 第四章 结论与讨论
• 1 结论
• 2 讨论
• 2.1 转基因过程中污染的原因及讨论
• 2.1.1 细菌污染
• 2.1.2 真菌污染
• 2.1.3 褐化
• 2.1.4 玻璃化
• 2.1.5 白化苗
• 2.2 对PCR扩增结果的讨论
• 2.3 对Southern Blot结果的讨论
• 参考文献
• 图版
• 附录Ⅰ:常用培养基的配制
• 附录Ⅱ:常用试剂的配制
• 致谢
• 个人简历