血必净对脓毒症大鼠体内MMP-9水平的影响及其肺脏的保护作用

论文摘要

目的:脓毒症（sepsis）是感染源引起的不可控制的全身炎症反应综合症（systemic inflammatory response syndrome, SIRS）。目前研究表明:脓毒症是引起急性肺损伤（acute lung injury, ALI）/急性呼吸窘迫综合症（acute respiratory distress syndrome, ARDS）的常见的病因,脓毒症及并发的多器官功能障碍综合征（multiple organ dysfunction syndrome, MODS）,救治棘手、死亡率高,可达70%。基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases, MMPs ）是一种锌依赖性蛋白水解酶,主要由中性粒细胞,单核/巨噬细胞以及嗜酸性粒细胞等炎症细胞产生,被激活后可降解基底膜,导致白细胞的渗出,促进炎症反应,引起组织水肿等。血必净注射液是具有对抗细菌毒素、降低内毒素水平、调节免疫及炎性介质、改善微循环、保护血管内皮细胞的有效药物。大量的动物实验以及部分临床试验均初步肯定血必净注射液在联合治疗危重病人全身炎症反应甚至脓毒症的疗效。本研究旨在通过对脓毒症大鼠血清中MMP-9浓度的影响并结合肺脏形态学及超微结构的变化,探讨血必净注射液对肺脏的保护作用及其作用机制。方法:选用雄性Sprague-Dawley大鼠36只,体重在250-300g之间,分为3组。空白组（Sham group）、氯化钠组（NS group）、血必净组（X group）,每组动物12只。CLP法制作脓毒症模型,并行颈动脉插管以备采血。空白组只开腹,牵拉盲肠但不结扎,术后尾静脉注射生理氯化钠4mL/kg;NS组行CLP,之后也经尾静脉注射生理氯化钠4mL/kg;X组行CLP后尾静脉注射血必净注射液4mL/kg（生药浓度为500g/l）。术后6h,颈动脉采血2mL,离心后取上清,-80℃保存,ELISA检测MMP-9水平。处死动物后,开胸取右肺中叶,吸干表面水分,去除支气管后称湿重,再置于85℃烤箱中24小时,称干重,计算肺湿/干重比（W/D）。按操作要求迅速剪取右肺下叶,HE染色法光镜观察肺脏形态学改变,透射电镜观察肺脏血管内皮的超微结构。结果:1 CLP术后一般情况观察:空白组大鼠麻醉清醒后活动基本如常,剖腹未见恶臭、腹腔水肿等表现;氯化钠组大鼠术后均有严重的脓毒症表现:动物术后苏醒延迟,逐渐出现精神萎靡、竖毛、寒颤、呼吸急促、呼吸困难及眼角分泌物等表现,剖腹可见浑浊脓血性渗液、恶臭、肠管水肿、变黑、肝肾充血水肿;而X组组动物术后各方面表现较轻。2各组大鼠6小时肺组织湿/干重（W/D）比变化:与空白组相比,盐水组大鼠肺湿/干重比明显增大（5.1504±0.1102 vs 4.5434±0.1579, P<0.01）;X组肺组织湿/干重比也显著增加（4.74±0.08 vs 4.54±0.16, P< 0.01）;与NS组相比,X组肺组织湿/干重比显著减小（4.74±0.08 vs 5.15±0.11, P<0.01）。3各组大鼠6h血清MMP-9水平的变化:尾静脉注入血必净或盐水6小时后,NS组血清中MMP-9水平显著高于Sham组（11.5358±1.7278 vs 4.4667±1.0116, P<0.01）;X组水平也比Sham高（7.4946±1.8549 vs 4.4667±1.0116, P<0.01）;与NS组相比,经血必净注射液治疗后的大鼠血清中MMP-9水平下降（7.4946±1.8549 vs 11.5358±1.7278, P<0.01）。4肺组织病理学改变:HE染色光镜下观察到Sham组大鼠肺组织结构完整,肺泡间隔无水肿,肺泡腔清晰;NS组肺泡间隔增宽、肺间质充血、水肿,肺泡腔可见大量中性粒细胞浸润,可见不同程度的肺不张、代偿性肺气肿等;X组改变明显减轻但较假手术组重。电镜下观察: Sham组基本正常,内皮细胞边缘清楚、细胞连接紧密,胞内可见少量吞饮小泡;NS组肺血管内皮细胞细胞连接模糊不清,胞浆内含有大量吞饮小泡;X组内皮细胞胞浆内有少量吞饮小泡,可见内皮细胞间隙。结论:1脓毒症大鼠血清MMP-9水平明显增高,升高的MMP-9导致肺血管内皮细胞受损,引起急性肺损伤;2血必净注射液可减少血清MMP-9水平,从而减轻肺血管内皮细胞损伤,改善肺血管通透性,对肺脏有一定的保护作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 血必净对脓毒症大鼠体内MMP-9 水平的影响及其肺脏的保护作用
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 脓毒症与肺损伤的研究进展
• 致谢
• 个人简历