论文摘要
实验背景与目的:Wnt拮抗因子基因沉默在恶性血液病的发生发展过程中起着重要的作用,可分泌型的Wnt拮抗因子调节Wnt经典途径。这些拮抗因子包括:Wif1和sFRPs,外源性表达拮抗因子可能调节Wnt信号,发挥抗肿瘤活性。有报道表明与IgG1的Fc片段融合的蛋白能够延长其在体内的半衰期。所以在本研究中我们构建了与IgG1-Fc片段重组融合的蛋白Wif1-Fc并研究了其在体外的抗恶性淋巴瘤的活性。实验方法:将人Wif1 cDNA与人IgG1的Fc片段eDNA融合形成Wif1-Fc基因,插入以CMV为启动子的腺病毒载体中,用重组的腺病毒感染293表达并分泌Wif1-Fc蛋白,重组的融合蛋白用Hi-tap protein A柱纯化。用重组融合蛋白与实体瘤和淋巴瘤细胞孵育,观察其作用,高三尖杉酯碱（HHT）用作化疗对照。实验结果:实体瘤细胞株用Ad-Wif1-Fc感染后能够表达Wif1-Fc融合蛋白,293细胞株既能够生产腺病毒也能高表达融合蛋白。SCID小鼠体内实验表明融合蛋白在体内也能保持其生物学活性。Wif1-Fc能够阻断淋巴瘤细胞系中Wnt信号的传递,下调其下游分子的表达,并诱导细胞凋亡,与HHT联合应用后可以增强其抗恶性淋巴瘤的疗效。结论:综上所述,我们成功的构建了Wnt拮抗分子Will与IgG1的Fc段融合基因Wif1-Fc,并能表达纯化融合蛋白Wif1-Fc。Wif1-Fc可以诱导恶性淋巴瘤细胞凋亡,而与HHT化疗联合后疗效显著增加,所以Wif1-Fc可以作为恶性淋巴瘤化疗的辅助治疗。