EB病毒相关胃癌病毒基因多态性的研究

论文摘要

目的分析我国鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）非高发区EB病毒相关胃癌（Epstein-Barr Virus associated gastric carcinoma,EBVaGC）组织中EBV分型及多种基因的多态性,确定是否存在与EBVaGC相关的EBV基因变异,深入探讨我国EBV基因型在人群中的分布以及EBV在胃癌发生发展中的作用。方法①收集山东地区362例新鲜胃癌组织及639例石蜡包埋胃癌组织,应用PCR-Southern杂交检测其特异性EBV DNA,进一步用原位杂交技术检测PCR阳性标本石蜡切片组织中EBV编码的小RNA（EBV encoding small RNA,EBER）1的表达,以确证EBVaGC。以PCR-Southern杂交检测260例健康人咽漱液（throatwashings,TWs）,筛选EBV阳性标本以做EB病毒相关胃癌病毒基因多态性研究的对照。②采用PCR-RFLP、巢式PCR及DNA测序等方法,检测EBV阳性标本病毒1/2分型、F/f分型、I/i分型及LMP1 Xho I（+）/（-）等4种基因变异,比较各组间EBV分型异同。③巢式PCR及DNA测序法对潜伏膜蛋白（latent membraneprotein）LMP1和LMP2A编码基因,以及裂解期基因BARF1和BHRF1的多态性进行全面检测,并参照B95-8标准株序列,应用DNA STAR软件对所得序列进行比对分析,同时与已发表文献中EBV基因多态性检测结果比对分析,以寻找EBVaGC及健康TWs中上述病毒基因变异规律,探讨是否存在与EBVaGC相关的EBV基因变异。结果①1001例胃癌组织中有63例为EBVaGC（6.29%）,而健康TWs中EBV阳性率为23.08%（60/260）。②EBVaGCs和EBV阴性胃癌（EBV-negative gastric carcinoma,EBVnGC）在年龄、发病部位及病理类型的差异有显著性,EBVaGCs在<60岁人群的感染率高于≥60岁人群的感染率（x2=11.581,P=0.0007）,胃底贲门和胃体发生率高于胃窦发生率（x2=4.684,P=0.030）,且病理类型以低分化腺癌多见（x2=19.797,P=0.0005）。残胃癌EBV感染率高达33.33%。此外,EBVaGCs和EBVnGC在性别和淋巴结转移的差异均无显著性。③EBVaGC中i型及Xho I（-）型EBV的比率高于健康人,差异有显著性;而1/2分型,F/f分型在EBVaGC和健康人群中的分布无差异。i/Xho I（-）亚型在EBVaGC中的比率（77.6%）高于健康人（52.6%）,差异有显著性（x2=7.115,P=0.008）。④据LMP1特征性突变分型,23例EBVaGC病毒株中,有22例出现China1型EBV特征性点突变,其中19株为China1型EBV。29例TWs株中,则有18例为China1型,该型EBV在两组间的差别无统计学意义。另外,TWs中尚有6例为Med-型,1例为China2型,1例为NC型,其余3例标本则具有不同型别的突变特点。分别有19例EBVaGC及22例TWs呈30bp（168294nt-168265nt,AA343-352）缺失,两者之间30bp缺失率差异无统计学意义。21株EBVaGC发生AA326 E→Q突变,而TWs中仅有7株,EBVaGC此位点突变率远高于健康对照。⑤与EBV B95-8毒株比较发现,EBVaGC及健康对照TWs标本LMP2A基因共出现30处错义突变,并导致9处CTL表位变异,其中4处表位的变异情况为首次报道;4处突变为所有标本共有。外显子1与外显子2-8变异不同步:外显子1各变异类型在EBVaGC及健康对照中分布频率无显著性差异;而外显子2-8中主要变异类型Group1出现频率在EBVaGC和TWs中的分布有显著性差异;氨基末端主要功能区在所有标本中均严格保守。⑥除BHRF1基因编码区内1处突变（AA88 L→V）在多株标本出现外,各标本病毒裂解期基因BARF1及BHRF1未发现一致序列变异,仅有的少数变异呈散在分布。与B95-8标准株序列相比,各标本BARF1序列同源性均≥98.9%,而BHRF1同源性均≥99.1%。EBVaGC及健康人群TWS标本间两基因均无明显差异。BHRF1基因变异多分布于现已确认的bc1-2同源结构域外。结论①EBV感染与部分胃癌的发生有关,且EBVaGC具有独特临床病理特征。②本研究初步证实i/Xho I（-）型EBV是与山东地区EBVaGC相关的变异型。③首次证实以LMP1基因变异分类的China1型为山东地区EBVaGC和健康人群中的优势病毒亚型。AA326 E→Q突变可能与胃癌发生相关。④首次对EBV LMP2A全编码基因进行综合分析,将外显子1与外显子2-8的序列多态性分型,并探讨各变异类型与地域或疾病间的关系。研究表明山东地区EBVLMP2A基因外显子1各变异类型呈地域相关性;证实4处中国EBV共有的特异突变;而外显子2-8主要变异类型Group1可能与EBVaGC有一定相关性。⑤裂解期基因BARF1及BHRF1序列在EBVaGC及TWs中均高度保守,提示它们在维持病毒基本生物学活性上具有关键作用,两基因序列多态性分析为首次报道。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第一部分 EB 病毒相关胃癌临床病理特征分析
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一章 材料与方法
• 第二章 结果
• 第三章 讨论
• 参考文献
• 第二部分 EB 病毒相关胃癌中病毒分型的研究
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一章 材料与方法
• 第二章 结果
• 第三章 讨论
• 参考文献
• 第三部分 EB 病毒相关胃癌中病毒潜伏期及裂解期基因序列多态性分析
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一章 材料与方法
• 第二章 结果
• 第三章 讨论
• 参考文献
• 研究结论
• 综述
• 参考文献
• 攻读学位期间的研究成果
• 致谢