壳聚糖及其衍生物作为低分子肝素口服吸收载体的研究

论文摘要

本文对基于低分子肝素（依诺肝素）和壳聚糖及其衍生物（三甲基壳聚糖、聚乙二醇化三甲基壳聚糖、巯基化壳聚糖）所形成的自组装多聚电解质络合物（PEC）进行了研究,对影响其形成的相关因素进行了考察,并对其促进低分子肝素口服吸收的作用进行了探讨。壳聚糖作为大分子药物的吸收促进剂和基因给药载体在药剂学领域已得到广泛的应用,而这些作用均与其分子量密切相关。本文考察了亚硝酸钠氧化降解法解聚壳聚糖的影响因素,证明解聚壳聚糖的分子量随亚硝酸钠浓度提高而降低。近来,壳聚糖的巯基化衍生物因其良好的生物黏附性而备受关注。本文考察了由碳二亚胺盐酸盐及N-羟基丁二酰亚胺催化合成壳聚糖-半胱氨酸偶合物的反应影响因素,优化了反应条件,考察了其生物黏附性同巯基取代度之间的关系。本文建立确证了低分子肝素体外检测的天青A法。制备了低分子肝素和壳聚糖及其衍生物所形成的PEC,应用动态光散射等技术对其形成过程进行了表征,应用原子力显微镜对其粒子形态进行了考察。PEC的形成受到多种因素的影响,包括体系pH,聚合物间质量比,聚合物分子量、浓度和结构等。实验证明,在最适条件下,可以制得粒径范围在200-500 nm的球形荷正电的PEC粒子,包封率约为90%。聚合物的结构修饰可以改变相应PEC的粒径、荷电性、形态等。实验表明,PEC的形成主要是因同时携带相反电荷的聚合物之间的静电相互作用而引起。以Kcps值为指标对PEC的生物黏附性进行了体外考察,证明其受聚合物分子量和结构的影响。实验证明了所得PEC对pH、温度及蛋白水解酶的稳定性。制备了以3%蔗糖为保护剂的PEC冻干制品。本文以活化部分凝血活酶时间（APTT）为指标,考察了基于不同聚合物的PEC在大鼠体内对低分子肝素口服吸收的促进作用。实验表明不同PEC对低分子肝素的口服吸收均有促进作用,且受到聚合物分子量和结构的影响。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 1. 大分子药物口服给药研究进展
• 2. 壳聚糖及其衍生物
• 3. 低分子肝素
• 4. 实验构想
• 第一章 壳聚糖及其衍生物的制备和表征
• 第一节 不同分子量壳聚糖的制备
• 1 材料与仪器
• 1.1 材料
• 1.2 仪器
• 2 实验方法
• 2.1 壳聚糖的解聚
• 2.2 壳聚糖平均分子量测定
• 3 结果与讨论
• 3.1 分子量测定
• 3.2 解聚的影响因素考察
• 3.2.1 反应时间的影响
• 3.2.2 亚硝酸钠与壳聚糖摩尔比的影响
• 4 小结
• 第二节 巯基化壳聚糖的制备及其相关性质考察
• 1 材料与仪器
• 1.1 材料
• 1.2 仪器
• 2 实验方法
• 2.1 合成原理
• 2.2 壳聚糖-半胱氨酸偶合物（CS-Cys）的合成
• 2.3 巯基含量测定
• 2.4 红外光谱测定
• 2.5 溶胀性能的考察
• 2.6 生物黏附性考察
• 2.7 统计学处理
• 3 结果与讨论
• 3.1 影响聚合物巯基取代度的相关因素考察
• 3.1.1 反应时间
• 3.1.2 体系pH值
• 3.1.3 半胱氨酸用量
• 3.1.4 聚合物分子量
• 3.2 红外光谱
• 3.3 不同pH和巯基取代度对溶胀性能的影响
• 3.4 生物黏附性考察
• 4 小结
• 第二章 低分子肝素的体外分析方法
• 1 材料与仪器
• 1.1 材料
• 1.2 仪器
• 2 实验方法
• 2.1 试剂配制
• 2.2 检测波长的选择
• 2.3 标准曲线
• 2.4 重现性实验
• 2.5 共存物质的影响
• 3 结果与讨论
• 3.1 检测波长的选择
• 3.2 标准曲线
• 3.3 重现性
• 3.4 共存物质的影响
• 4 小结
• 第三章 壳聚糖/低分子肝素纳米复合物的制备和相关性质研究
• 1 材料与仪器
• 1.1 材料
• 1.2 仪器
• 2 实验方法
• 2.1 纳米络合物的制备
• 2.2 粒径测定
• 2.3 Zeta电位测定
• 2.4 包封率测定
• 2.5 原子力显微镜（AFM）观测粒子形态
• 2.6 PEC生物黏附性的体外检测
• 2.7 PEC稳定性考察
• 2.7.1 pH值对CS/enoxaparin PEC稳定性的考察
• 2.7.2 蛋白酶对CS/enoxaparin PEC稳定性的考察
• 2.7.3 温度对CS/enoxaparin PEC稳定性的考察
• 2.8 冷冻干燥
• 2.9 统计学处理
• 3 结果与讨论
• 3.1 体系pH的影响
• 3.2 剂量比的影响
• 3.3 聚合物分子量及浓度的影响
• 3.4 聚合物分子结构的影响
• 3.5 离子强度的影响
• 3.6 PEC的形态学考察
• 3.7 PEC生物黏附性的体外检测
• 3.8 PEC稳定性考察
• 3.8.1 pH值对CS/enoxaparin PEC稳定性的影响
• 3.8.2 蛋白酶对CS/enoxaparin PEC稳定性的影响
• 3.8.3 温度对CS/enoxaparin PEC稳定性的影响
• 3.9 冷冻干燥
• 3.9.1 冷冻干燥工艺的考察
• 3.9.2 冷冻干燥处方的筛选
• 3.9.2.1 一元冻干保护剂
• 3.9.2.2 二元冻干保护剂
• 3.9.3 冻干PEC相关性质考察
• 3.9.3.1 粒径测定
• 3.9.3.2 Zeta电位测定
• 3.9.3.3 包封率测定
• 3.9.3.4 稳定性考察
• 4 小结
• 第四章 低分子肝素纳米复合物的体内吸收研究
• 1 材料与仪器
• 1.1 材料
• 1.2 仪器
• 1.3 实验动物
• 2 实验方法
• 2.1 给药与样本采集
• 2.2 活化部分凝血活酶时间（APTT）测定
• 2.3 数据处理
• 2.4 统计学处理
• 3 结果与讨论
• 3.1 壳聚糖分子量的影响
• 3.2 聚合物结构的影响
• 3.3 吸收机制探讨
• 4 小结
• 全文结论
• 参考文献
• 致谢
• 发表文章