大鼠C6脑胶质瘤3.0T MR-DTI及瘤周水肿浸润组织FA值与AQP1的相关性研究

论文摘要

第一部分Wistar大鼠C6脑胶质瘤模型的建立目的：建立稳定可靠的Wistar大鼠C6脑胶质瘤晚期阶段模型。材料和方法：1、C6细胞在含10%FBS、1%青链霉素混合液的RPMI-1640完全培养基中,置于37℃、5%CO2培养箱中培养,胰酶消化、终止,采集对数生长期的C6细胞计数,检测细胞活性,加完全培养基调整浓度。2、采用随机数字表将22只Wistar大鼠分成实验组17只,假手术组（对照组）5只。通过立体定向技术,将浓度大于1.0x106.10μ1的C6细胞接种至实验组大鼠右侧尾状核区,假手术组大鼠在相同部位注射完全培养基。3、肿瘤细胞接种后约3-4周对相应大鼠进行磁共振扫描和病理观察。结果：1、17只大鼠接种肿瘤细胞,1只死于术后约1h,1只于接种后15日不明原因死亡（随后病理证实有肿瘤形成）,其余15只肿瘤细胞接种大鼠在随后的MRI和病理检查中均证实有肿瘤形成,接种成功率100%。假手术组5只大鼠均存活,且未见肿瘤形成。2、术后经磁共振及实验结束后的病理证实肿瘤细胞接种后约3-4周存在瘤周水肿和/或肿瘤细胞浸润。结论：Wistar大鼠C6脑胶质瘤模型稳定可靠,生长迅速,接种成功率高,肿瘤细胞接种后约3-4周,可满足瘤周水肿和/或肿瘤浸润实验要求。第二部分大鼠C6脑胶质瘤在体3.0T磁共振张量成像研究目的：探讨3.0T磁共振张量成像在Wistar大鼠C6胶质瘤肿瘤区和对侧正常脑实质区的各向异性分数（FA）值及平均弥散系数（MD）值,并比较两种不同的方法选取感兴趣区（ROI）对测量结果的影响。材料和方法：采用随机数字表将22只Wistar大鼠分成实验组17只,假手术组（对照组）5只。通过立体定向技术,将浓度大于1.0x106/10μ1的C6细胞接种至实验组大鼠右侧尾状核区,假手术组大鼠在相同部位注射完全培养基。肿瘤细胞接种后约3-4周,利用3.0T高场强医用磁共振扫描仪,大鼠专用线圈对大鼠C6胶质瘤模型行常规MRI、DT工、T1WI及SAG T1-3D-bravo增强检查,结合T2WI、FLAIR、T1WI及SAGT1-3D-bravo增强确定肿瘤与水肿区,借助Function Tool软件对DTI数据后处理,避开出血、坏死区,选取多个即3个等大（2mmm2,9pix）ROI和单个较大ROI,获得肿瘤实质和对侧正常脑实质区的FA及MD值。结果：15只成瘤大鼠中,肿瘤区和对侧正常脑实质区3个等大ROI FA平均值分别为（0.1075±0.02）和（0.312±0.024）,而3个等大ROIMD值分别为（0.944±0.029）×10-3mm2/s和（0.808±0.036）×10-3mm2/s,两组结果经两样本t检验显示差别均有统计学意义（P＜0.05）。肿瘤区和对侧正常脑实质区单个较大ROI FA平均值分为（0.118±0.039）和（0.310±0.052）,而单个较大ROI MD平均值分别为（0.941±0.047）×10-3mm2/s和（0.806±0.043）×10-3mm2/s,两组结果经两样本t检验显示差别亦有统计学意义（P＜0.05）。两种不同的方法选取肿瘤区ROI获得的FA值经配对t检验显示有统计学意义（P<0.05）,而MD值间无统计学意义（P＞0.05）。结论：用临床3.0T MRI行大鼠C6胶质瘤DTI检查切实可行,通过测量肿瘤区、对侧正常脑实质区FA及MD值,为以后的科研工作提供了有用的参考。方法学上,本研究发现两种不同的方法选取ROI对FA值测量结果有影响,而对MD值测量结果无明显影响。第三部分AQP1在鼠脑C6胶质瘤瘤周水肿浸润组织中的表达与FA值的相关性研究目的：研究Wistar大鼠C6脑胶质瘤瘤周水肿浸润组织的磁共振弥散张量成像（MR-DTI）的特征,并与免疫组织化学水通道蛋白1（AQP1）对照,探讨AQP1在胶质瘤瘤周水肿浸润组织中的表达与MR-DTI参数部分各向异性分数（FA）的相关性。材料与方法：采用随机数字表将22只Wistar大鼠分成实验组17只,假手术组（对照组）5只。通过立体定向技术,将浓度大于1.0×106/10ul的C6细胞接种至实验组大鼠右侧尾状核区,假手术组大鼠在相同部位注射完全培养基。肿瘤细胞接种后约3～4周,利用3.0T高场强医用磁共振扫描仪,大鼠专用线圈对大鼠C6胶质瘤模型行常规MRI、DTI、FLAIR、T1WI及SAG T1-3D-bravo增强检查,结合T2WI、FLAIR.T1WI及SAG T1-3D-bravo增强确定肿瘤与水肿区,借助Function Tool软件对DTI数据后处理,避开出血、坏死等影响结果的区域,选取多个即3个等大（2mm2,9pix）ROI,获得相应部位的FA值。设肿瘤对侧正常脑组织为内对照。MRI扫描完成后立即行4%的多聚甲醛灌注固定全脑,之后过量1%的戊巴比妥钠处死大鼠取全脑固定,选取与DTI肿瘤最大层面相对应的瘤周水肿区脑组织做连续冠状切片,进行HE染色和AQP1抗体免疫组织化学检查。Pearson相关分析法检测FA值和相应部位的AQPl阳性表达的IOD值的相关性,计算相关系数,并进行t检验,以P<0.05为有统计学意义。结果：15只成瘤大鼠中,瘤周水肿区约3-4周3个等大ROI FA平均值为（0.204±0.036）,较对侧正常脑组织多个ROI FA平均值（0.310±0.027）降低,不过没有瘤体降低明显,两组结果经两样本t检验显示差别有统计学意义（P＜0.05）。Pearson相关分析显示,肿瘤水肿浸润组织的FA值与AQP1阳性表达IOD值之间存在负相关（r=-0.81,P<0.05）。结论：Wistar大鼠C6脑胶质瘤瘤周水肿浸润组织MR-DTI参数FA值与AQP1之间存在负相关,随着AQP1阳性表达程度的增高,FA值降低。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 中英文对照
• 第一部分 Wistar大鼠C6脑胶质瘤模型的建立
• 第一章 前言
• 第二章 材料和方法
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 第三章 结果
• 3.1 C6细胞株
• 3.2 大鼠C6胶质瘤动物模型制作
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 附图
• 第二部分 大鼠C6脑胶质瘤的在体3.0T磁共振张量成像研究
• 第一章 前言
• 第二章 材料和方法
• 2.1 动物模型的制作
• 2.2 主要仪器设备及实验药品、试剂
• 2.3 PBS磷酸盐缓冲液配制
• 2.4 MRI扫描
• 2.5 病理检查
• 2.6 图像处理和统计学分析
• 第三章 结果
• 3.1 磁共振检查结果
• 3.2 病理结果
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 附图
• 第三部分 大鼠C6脑胶质瘤瘤周水肿浸润组织MR张量成像与水通道蛋白的相关性研究
• 第一章 前言
• 第二章 材料和方法
• 2.1 动物模型的制作
• 2.2 主要仪器设备及实验药品、试剂
• 2.3 MRI扫描
• 2.4 病理检查
• 2.5 图像处理和统计学分析
• 第三章 结果
• 3.1 磁共振检查结果
• 3.2 病理结果
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 附图
• 综述一
• 参考文献
• 综述二
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间主要研究成果