补益中药仙茅的毒效学和靶器官毒作用规律研究

论文摘要

目的：研究补益类有毒中药仙茅经口给予小鼠和大鼠的急性毒性、长期毒性试验及毒性效应谱、毒性效应特征、量—毒关系、时—毒关系、靶器官和可逆性,探讨可能的毒作用模式（相关关系）/毒作用机制（因果关系）。方法：①急性毒性实验：研究仙茅水提物、仙茅乙醇提取物一次或者24小时内多次经口给予的急性毒效应表现、剂量-反应关系、靶器官和可逆性,并测定其LD50或最大给药量/最大耐受量。②长期毒性试验：实验用大鼠分成仙茅醇提物高剂量组（120g生药/kg）、中剂量组（60g生药/kg）、低剂量组（30g生药/kg）和空白对照组（等容量蒸馏水）,每日灌胃给药1次,连续给药30天、90天以及停药恢复性观察15天。观察指标包括一般症状和体征、血液细胞学、血液生化学及肉眼和光镜病理学观察。③毒性作用机制研究：实验用大鼠分成仙茅醇提物高剂量组（120g生药/kg）、低剂量组（30g生药/kg）和空白对照组（等容量蒸馏水）,每日灌胃给药1次,连续给药30天、对与肝损伤相关的血清酶学指标LDH、MDH、SDH、GST、MAO、GDH、IDH、LAP和与肾脏氧化损伤相关的血清酶学指标MDA、-SH、GSH和SOD进行测定,对肝微粒体中肝药酶CYP450、b5、CYP1A1、CYP2E1、CYP3A4含量进行测定,对与生殖器官损伤相关的血清性激素FSH、LH和T进行测定,电镜观察仙茅乙醇提取物对肝脏、肾脏和睾丸、卵巢的超微结构病理学的影响；采用体外肝细胞培养技术,对不同浓度仙茅苷和仙茅乙醇提取物对肝细胞上清液中LDH、AST和ALB的含量进行测定。结果：①急性毒性实验：仙茅水提取物最大浓度、最大容积灌胃给药未见死亡,最大给药量为207.6g（原生药）/kg,该剂量相当于药典推荐口服每日最高推荐剂量1384倍；仙茅乙醇提取物灌胃半数致死量LD50为215.9g（原生药）/kg,为药典推荐口服剂量的1439倍；急性毒性症状主要变现为自发活动减少、静伏,少动,死亡之前抽搐,大剂量给予仙茅醇提物组织病理学可见肝、肾等主要脏器水肿充血的病理学改变。②长期毒性试验：仙茅乙醇提取物在本实验条件下灌胃给药30天后,与对照组比较,高、中、低剂量组AST、BUN、肝、肾脏器系数升高（p<0.05～0.01）,高剂量组ALT、睾丸脏器系数升高（p<0.05～0.01）；给药90天后,与对照组比较,高、中剂量组ALT升高（p<0.05～0.01）,高剂量组BUN、睾丸脏器系数升高（p<0.05）,高、中、低剂量组CREA、肝、肾脏器系数升高（p<0.01）,中剂量组子宫脏器系数降低（p<0.05）；停药15天后,上述各指标与对照组比较无显著差异（p>0.05）；光镜下给药30天、90天及恢复期大鼠未见病理学改变。③毒性机制研究：仙茅乙醇提取物在本实验条件下灌胃给药30天后,高、低剂量组血清LAP、FSH的含量升高（p<0.05～0.01）；高、低剂量组肝微粒体中细胞色素b5和CYP1A1的含量降低（p<0.05～0.01）；不同浓度仙茅苷和仙茅乙醇提取物溶液在不同时间段可升高肝细胞上清液中LDH和ALB的含量（p<0.05～0.01）；高、低剂量组血清SOD的活力降低（p<0.01）；高剂量组血清-SH和GSH的含量降低（p<0.01）；透射电镜下观察发现给药高剂量组大鼠肝、肾无明显改变,而雄性大鼠的睾丸及雌性大鼠的卵巢均呈现线粒体肿胀,空泡等病理改变。结论：①仙茅两种提取物单次给药在药典拟定临床推荐剂量下安全无毒；超大剂量给药仍有一定毒性反应,其中乙醇提取物毒性明显大于水提取物,可引起动物静伏、少动、抽搐及死亡,肝、肾等重要脏器充血水肿。②仙茅乙醇提取物大剂量、长期反复给药,可能引起血清BUN、CREA、AST及ALT升高,肝脏、肾脏、睾丸脏器系数增加。③仙茅乙醇提取物可能的毒性靶器官涉及到肝、肾以及生殖器官,可能与升高血清LAP和FSH水平,降低血清SOD的活力和-SH和GSH的含量,降低肝微粒体中细胞色素b5和CYP1A1的含量,升高肝细胞中LDH、ALB的含量和引起睾丸和卵巢线粒体肿胀,空泡变性等作用有关。

论文目录

• 前言
• 摘要
• Abstract
• 图表清单
• 英汉缩略语名词对照表
• 1. 文献研究
• 1.1 本草及古籍文献研究
• 1.1.1 仙茅古今名实考
• 1.1.2 性能、功效与应用
• 1.2 现代研究
• 1.2.1 化学研究
• 1.2.2 药理研究
• 1.2.3 临床研究
• 1.2.4 毒性研究
• 2 实验研究
• 2.1 急性毒性实验研究
• 2.1.1 目的
• 2.1.2 材料
• 2.1.2.1 实验药品与试剂
• 2.1.2.2 实验仪器
• 2.1.2.3 实验环境及实验动物
• 2.1.3 方法
• 2.1.3.1 仙茅水提取物的急性毒性实验
• 2.1.3.2 仙茅乙醇提取物的急性毒性实验
• 2.1.4 结果
• 2.1.5 小结
• 2.2 仙茅乙醇提取物的长期毒性实验研究
• 2.2.1 目的
• 2.2.2 材料
• 2.2.2.1 实验药品与试剂
• 2.2.2.2 实验仪器
• 2.2.2.3 实验环境及实验动物
• 2.2.3 方法
• 2.2.3.1 实验设计
• 2.2.3.2 一般观察
• 2.2.3.3 血液细胞学
• 2.2.3.4 血液生化学
• 2.2.3.5 系统尸解和组织病理学
• 2.2.3.6 统计学处理
• 2.2.4 结果
• 2.2.5 小结
• 2.3 仙茅乙醇提取物的靶器官毒作用规律研究
• 2.3.1 目的
• 2.3.2 材料
• 2.3.2.1 实验药品与试剂
• 2.3.2.2 实验仪器
• 2.3.2.3 实验环境与实验动物
• 2.3.3 方法
• 2.3.3.1 仙茅乙醇提取物对肝脏的影响
• 2.3.3.1.1 仙茅乙醇提取物对肝血清酶的影响
• 2.3.3.1.2 仙茅乙醇提取物对肝脏超微结构病理形态学的影响
• 2.3.3.1.3 仙茅乙醇提取物对肝微粒体相关肝药酶的影响
• 2.3.3.1.4 仙茅乙醇提取物与仙茅苷对体外肝细胞的影响
• 2.3.3.2 仙茅乙醇提取物对肾脏的影响
• 2.3.3.2.1 仙茅乙醇提取物对肾脏氧化损伤机制相关的血清指标的影响
• 2.3.3.2.2 仙茅乙醇提取物对肾脏超微结构病理形态学的影响
• 2.3.3.3 仙茅乙醇提取物对生殖腺的影响
• 2.3.3.3.1 仙茅乙醇提取物对血清性激素的影响
• 2.3.3.3.2 仙茅乙醇提取物对睾丸、卵巢超微结构病理形态学的影响
• 2.3.3.4 统计学处理
• 2.3.4 结果
• 2.3.5 小结
• 2.4 讨论
• 2.4.1 关于仙茅毒性认识的讨论
• 2.4.1.1 古代文献对仙茅毒性的认识
• 2.4.1.2 现代研究认为仙茅毒性的可能原因
• 2.4.2 关于仙茅急性毒性试验的讨论
• 2.4.3 关于仙茅长期毒性试验的讨论
• 2.4.4 关于仙茅毒性靶器官毒作用规律的讨论
• 2.4.4.1 仙茅乙醇提取物对肝脏损伤的讨论
• 2.4.4.1.1 与肝脏损伤相关的血清酶学的讨论
• 2.4.4.1.2 肝微粒体中相关肝药酶的讨论
• 2.4.4.1.3 不同浓度和时间段仙茅苷与仙茅醇提取物对肝细胞影响的讨论
• 2.4.4.1.4 肝脏的超微结构病理学的讨论
• 2.4.4.2 仙茅乙醇提取物对肾脏损伤的讨论
• 2.4.4.2.1 与肾脏损伤相关的血清酶学讨论
• 2.4.4.2.2 肾脏的超微结构病理学讨论
• 2.4.4.3 仙茅乙醇提取物对生殖器官损伤的讨论
• 2.4.4.3.1 与生殖器官损伤相关的血清性激素讨论
• 2.4.4.3.2 生殖器官的超微结构病理学讨论
• 2.4.5 仙茅毒性规律的总结
• 2.5 结论
• 2.6 问题与展望
• 参考文献
• 综述——关于补益中药仙茅的认识与思考
• 参考文献
• 附图
• 致谢
• 在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果