新生奶犊牛天然被动抗体IgG吸收规律的研究

论文摘要

反刍动物的胎盘为结缔组织绒毛膜型,母源抗体不能转移给胎儿。这些动物的幼畜出生后必须通过吮吸初乳才能获得天然被动免疫力。主要包括以下过程:分娩前母牛将通过肠道环境所建立的各种适宜的抗体有选择的转移并富集到初乳中,产后分泌含有大量免疫球蛋白（Ig）的初乳,犊牛通过吮吸初乳,在肠道完成对Ig的非特异性吸收后,进入血液循环中,从而避免了仔畜被各种病原微生物的的袭击。这种由乳汁预防仔畜减少感染、防止疾病的途径,也可称为乳汁免疫（Lactogenic Immunity）。初乳中的免疫球蛋白占总乳清蛋白的60%以上,其中80%为IgG,是动物机体抗感染免疫的主力,同时也是血清学研究主要抗体。国外报道可将吮吸初乳后一段时间内犊牛血清中IgG含量作为衡量犊牛被动免疫力转移情况的指标。本研究采用ELISA方法检测初乳和犊牛血清中IgG含量的变化规律,希望为进一步研究被动免疫提供研究方法和一定的参考。本研究采用饱和硫酸铵盐析法从牛血清中粗提IgG,将粗提产物过葡聚糖G200凝胶层析柱得IgG和IgM混合蛋白,再过纤维素DEAE-52柱纯化牛IgG,经SDS-PAGE电泳鉴定为IgG。免疫兔制备兔抗牛IgG抗体,然后用辣根过氧化酶标记,制备兔抗牛IgG酶标抗体。同时免疫小白鼠制备鼠抗牛IgG包被抗体。分别建立检测牛初乳和犊牛血清中IgG的双抗体夹心ELISA方法。ELISA操作程序:将小鼠抗牛IgG以包被液（pH9.5的碳酸盐缓冲液）稀释成最适包被浓度30μg/mL,分别吸取100μL包被反应板,同时各板设阴、阳性对照、抗体对照、酶标抗体对照和底物对照,置37%温育3h,甩去包被液,用含0.05%Tween-20的0.01mol/LpH7.4 PBS（PBST）作为洗涤液进行洗涤3次,每次3min（即3×3’洗涤）;加4倍稀释的待检初乳100μL或100倍稀释的待检犊牛血清,37℃感作1.5h,3×3’洗涤;将酶标抗体用0.1%BSA-PBST稀释成工作浓度1:400,每孔加入100μL,37℃感作1h,3×3’洗涤;每孔加入新配制的底物（OPD）溶液100μL,37%湿盒避光感作30min;每孔加2mol/L H2SO4一滴终止反应,以酶联免疫检测仪测定OD值（490nm）,判定结果。按试验设计采集四平地区某大型奶牛场一个月内分娩的20头奶牛的初乳以及新生犊牛血清。应用建立的初乳和犊牛血清双抗体夹心ELISA方法进行检测。结果表明:1.初乳中IgG的蛋白含量从分娩后0h开始至第7天,变化呈现出一定的规律。2.饲喂初乳后犊牛血清中IgG含量变化有一定的规律性。表现为由出生时血清IgG接近于零,逐渐增高,在出生后36h左右,到达最高,以后维持在这一水平上,随时间延长缓慢降低的趋势。而对照组犊牛血清中IgG含量则一直维持在低水平上。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1.1 天然被动免疫
• 1.2 初乳中免疫球蛋白的研究进展
• 1.3 免疫球蛋白IgG的检测方法
• 1.4 研究的目的与意义
• 第二章 正文
• 2.1 材料与方法
• 2.2 结果与分析
• 2.3 讨论
• 第三章 结论
• 参考文献
• 附录主要试剂的配制
• 致谢
• 个人简介