论文摘要
背景:慢性丙型病毒性肝炎（CHC）患者体内常能检测出多种自身抗体。但产生机制至今尚未阐明。有研究发现,HCV核心抗原的一段氨基酸序列与宿主抗原（GOR）有交叉免疫反应性,产生的自身抗体滴度也一般较低,不符合自身免疫紊乱表现,因此认为HCV感染者自身抗体阳性可能与宿主因素有关;另有研究证明:①50%-90%的混合性冷球蛋白血症及与其相关的肾小球肾炎患者HCV-RNA阳性;②在HCV感染者中可以检出自身免疫性肝炎标志性抗Ⅰ型肝肾微粒体抗体（LKM1）;③HCV感染者的肝脏组织学改变与自身免疫性肝病很相似等,所以人们推测HCV感染的发病机理有自身免疫因素参与,而HCV感染者伴多种自身抗体的产生可能系HCV诱导机体自身免疫紊乱所致。目的:HCV具有泛嗜性,免疫细胞可被感染,T淋巴细胞亚群改变,之间的相互协调或（及）制约功能遭到破坏已有报道。作为产生抗体的B淋巴细胞及其亚群与之功能有无改变,目前尚未见报道。本研究通过,对HCV感染者中自身抗体阳性的患者,检测血清B淋巴细胞刺激因子（BLyS）的含量;外周血单个核细胞BLyS-mRNA的表达水平以及检测B淋巴细胞亚群变化等实验。并以自身抗体阴性的HCV感染者和健康献血员作比较。目的在于:①研究HCV感染与自身免现象的关系。②进一步探讨丙型肝炎的发病机制,③为慢性丙型肝炎患者,特别是有自身抗体阳性的HCV感染者制定个体化治疗方案提供科学依据。方法:（1）设立健康对照组、慢性丙肝自身抗体阳性组和慢性丙肝自身抗体阴性组。（2）常规方法检测肝功能、免疫球蛋白、类风湿因子、放射免疫法检测肝纤维化四项血清学指标、定性法检测冷球蛋白以及采用ELISA法检测血清B淋巴细胞刺激因子。（3）对27例HCV-RNA阳性的慢性丙肝患者给予干扰素联合利巴韦林抗病毒治疗,治疗期间每周采血一次,连续观察12周,观察血清HCV-RNA载量与治疗前血清BLyS水平的关系。（4）常规分离、培养人外周血单个核细胞（PBMC）,利用半定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法,分组检测BLyS-mRNA的表达水平。（5）用流式细胞仪技术检测外周血淋巴细胞亚群,以BLyS、CD19、CD38阳性淋巴细胞为观察指标,分组观察BLyS阳性淋巴细胞、B细胞亚群的百分数以及它们之间的相关性。（6）实验数据分别进行统计学分析处理。结果:58例慢性丙肝患者中,16例类风湿因子阳性,占27.6%。健康对照组仅1名,占2.5%。慢性丙型肝炎患者类风湿因子阳性率高于健康对照组（P＜0.05）。慢性丙肝患者血清BLyS平均水平为（4.7±1.1）ng/ml,健康对照为（3.1±0.67）ng/ml,慢性丙肝患者血清BLyS水平高于健康对照（P＜0.01）。慢性丙肝患者中,类风湿因子阳性者血清BLyS平均水平为（5.4±0.98）ng/ml,阴性者为（4.4±1.0ng/ml）,类风湿因子阳性者BLyS水平高于阴性者（P＜0.01）。慢性丙型肝炎患者BLyS因子水平与肝纤维化血清学指标均有一定的相关性（HA;r=0.599 P＜0.01;C-Ⅳ:r=0.392 P＜0.05;PcⅢ:r=0.268P＜0.05;LN:r=0.336 P＜0.05）。而与γ-球蛋白（IgG、IgA、IgM）,ALT,HCV-RNA无相关性（IgG:r=0.161,P＞0.05;IgA:r=0.21,P＞0.05;IgM:r=0.254,P＞0.05,ALT:r=0.23,P＞0.05:HCV-RNA:r=0.19,P＞0.05）。对27例慢性丙肝患者抗病毒应答作随访调查,BLyS正常组的3周、6周、9周、12周的积累病毒学应答（VR）分别为16.7%,41.7%,66.7%,75.0%,而BLyS升高组分别为0%,6.7%,13.3%,26.7%。BLyS升高组的中位VR时间为10.3周,BLyS正常组为6.6周。Kaplan-Meier分析表明,两组比较差异有统计学意义（Log-ranktest,P＜0.05）。慢性丙型肝炎患者PBMC中的BLyS-mRNA的表达明显高于健康对照（0.54±0.22 vs 0.40±0.14 P＜0.01）和慢性乙型肝炎患者（0.54±0.22 vs 0.42±0.17,P＜0.05）。慢性丙肝患者冷球蛋白阳性率为16.7%。慢性丙型肝炎患者中,有自身免疫现象者（冷球蛋白和或类风湿因子阳性）比无自身免疫现象者BLyS-mRNA表达水平更高（0.64±0.25 vs 0.49±0.20,P＜0.05）。无干扰素-γ刺激情况下,慢性丙型肝炎组和健康对照组在0h,6h,12h,24h的BLyS-mRNA表达水平无明显变化（HCV:F=1.86,P＞0.05 Control:F=1.17,P＞0.05）。经INF-γ刺激后,慢性丙肝患者和健康对照外周血单个核细胞BLyS-mRNA的表达均在6h左右达到最高,以后逐渐下降,6h与0h比较差异有统计学意义（HCV:0.74±0.09 VS 0.50±0.10,P＜0.001;Control:0.52±0.12 VS 0.34±0.06,P＜0.01）。慢性丙型肝炎患者各个时间点BLyS-mRNA水平均高于相应时间点的健康对照（P＜0.05）。与健康对照相比,慢性丙肝患者外周血中BLyS+淋巴细胞、CD19+淋巴细胞、CD19+CD38+淋巴细胞（外周血早期浆细胞）百分率（%）以及CD19+CD38+/CD38+比值（%）显著增加（分别为4.0±2.2 vs 2.3±0.75,P＜0.05;21.6±6.0 vs 13.4±3.9,P＜0.05;12.1±5.8 vs 5.8±1.6,P＜0.01;23.8±11.9 vs 11.4±2.3 P＜0.01）,而CD38+淋巴细胞百分率（%）无明显的差异（52.0±8.4 vs 50.0±7.0 P＞0.05）。BLyS+淋巴细胞增加与CD19+CD38+淋巴细胞增加正相关（r=0.303,P＜0.05）。结论:（1）部分HCV感染者自身抗体阳性,检测血清中是否存在自身抗体,是判断HCV感染者自身免疫现象或自身免疫紊乱的重要标志物之一。（2）发现血清自身抗体阳性的HCV感染者血清BLyS水平明显升高,并与PBMC高表达BLyS-mRNA一致,说明过度的BLyS表达可能是刺激机体产生自身抗体的原因。（3）HCV感染者PBMC中BLyS+细胞、CD19+细胞百分率较健康人明显增高,BLyS+细胞百分率与CD19+CD38+细胞（外周血早期浆细胞）百分率呈正相关。进一步揭示了HCV感染者自身免疫现象,其可能的机制之一是BLyS介导的B淋巴细胞异常增生和功能紊乱有关。（4）血清BLyS水平与血清肝纤维化指标有相关性,折射出与HCV感染慢性化及预后密切相关。（5）BLyS水平高低与抗病毒治疗后病毒学应答相关,值得进一步研究。