论文摘要
目的:通过幽门螺杆菌（Helicobater pylori,简称Hp）免疫奶牛同时喂养清热化湿之中药方剂,获得富含幽门螺杆菌多克隆抗体和清热化湿中药活性成分的保健型免疫牛奶,用于预防和治疗幽门螺杆菌相关性胃病。方法:（1）Hp免疫奶牛及抗体测定:健康奶牛3头,分别肩部肌肉注射1012·L-1Hp悬液各2ml进行免疫,共4次,每次免疫前和末次免疫后第8、30天,取颈静脉全血（制血清）和鲜奶。用直接凝集法和双向琼脂扩散法测定牛奶中的抗体。（2）中药复方喂养奶牛及牛奶中中药成分检测:于末次免疫奶牛的第7天,分别在早、中、晚喂奶牛中药各一次,连续三天。初次喂药12小时后,采集颈静脉全血,并收集全部的牛奶。用抗中药特异性抗血清,采用层析纸双向扩散实验法检测牛奶中中药的相应成分。（3）保健型免疫牛奶体外抑菌实验:制直径为5mm的层析纸片,分别浸泡于保健型免疫牛奶、抗体牛奶、中药牛奶、中药煎剂、普通牛奶、生理盐水的液体中60min。真空低温干燥后4℃冰箱保存。将此药敏片贴于接种有SS1的培养皿上,37℃培养72h后,测量药敏片周围的抑菌环直径。（4）保健型免疫牛奶预防Hp动物感染:选wistar二级大鼠18只,分为6组,每天先用SS1菌液(1010·L-1)1ml灌胃,2h后再分别用保健型免疫牛奶、抗体牛奶、中药牛奶、中药煎剂、普通牛奶、生理盐水灌胃1.5ml,共7次。末次灌胃4周后处死动物,取胃组织行尿素酶实验检测和Hp分离培养。（5）保健型免疫牛奶治疗Hp动物感染:选wistar二级大鼠18只,用SS1菌液(1010·L-1)1ml灌胃2次,制备Hp动物感染模型,并经鉴定证实感染后,随机分为保健型免疫牛奶、抗体牛奶、中药牛奶、中药煎剂、普通牛奶、生理盐水组。每天分别灌胃1.5ml,共7次。末次灌胃4周后处死动物,取胃组织行尿素酶实验检测和Hp分离培养。（6）保健型免疫牛奶临床观察:将64例阳性患者随机分为4组。各组除口服枸椽酸铋钾、甲硝唑、阿莫西林胶囊三联疗法外,分别加服保健型免疫牛奶、抗体牛奶、中药牛奶、普通牛奶,连服2周。完全停药4周后,用13C尿素呼气实验检测Hp。之后每日晚睡前空腹服用上述牛奶,连服8周后,用13C尿素呼气实验检测Hp。观察四组的Hp感染根除率、再感染率、临床症状改善及服药后的副作用情况。结果:（1）牛奶相应抗体检测:Hp免疫前牛奶中测不到抗Hp抗体,在首次免疫后的第10天三头奶牛的牛奶中均出现了较低效价的抗体。经4次免疫后直接凝集法效价可达1:2048,双向琼脂扩散法效价可达1:32,之后1个月内未见抗体效价降低。（2）牛奶中中药成分检测:用层析纸双向扩散实验法检测,除未测到牛奶中公英成分外,其他中药均测到了相应成分。（3）体外抑菌实验:前四组均对Hp生长有明显的抑制作用。其中保健型免疫牛奶组强于抗体牛奶组和中药牛奶组。（4）预防Hp动物感染作用:保健型免疫牛奶与抗体牛奶组两项指标均呈阴性;中药牛奶与中药煎剂组两项指标呈弱阳性;普通牛奶与生理盐水组两项指标均呈强阳性。（5）治疗Hp动物感染:保健型免疫牛奶、抗体牛奶组两项指标呈弱阳性;中药牛奶、中药煎剂组两项指标呈阳性;普通牛奶与生理盐水组两项指标均呈强阳性。（6）临床观察:辅助治疗对中医证候的疗效:保健型免疫牛奶和中药牛奶组的总有效率高于对照组,统计学差异性显著（P<0.05）。抗体牛奶组低于上述两组,但略高于对照组,统计学差异性不显著（P>0.05）。辅助治疗对根除Hp感染的疗效:保健型免疫牛奶和抗体牛奶组配合西药三联疗法治疗对于根除Hp感染较高,中药牛奶组较对照组为高。但与对照组比较统计学差异均无显著性（P>0.05）。预防Hp再感染作用:治疗转阴后继续服用保健型免疫牛奶和抗体牛奶组,均未发现有再感染者,与对照组比较统计学差异显著（P<0.05）。服用中药牛奶组再感染较少,与对照组比较统计学差异无显著性（P>0.05）。辅助治疗减轻副作用情况的比较:保健型免疫牛奶或中药牛奶配合西药三联疗法治疗均能减轻后者的副作用。与对照组比较统计学差异性显著（P<0.05）。单纯含抗体牛奶减轻副作用的效果较对照组为好,但统计学差异性不显著（P>0.05）。结论:用Hp免疫奶牛4次,可使牛奶中出现较高效价的抗体,并维持30天不下降。之后每月免疫一次即可持续保持较高水平的抗体效价。喂牛中药12小时后在血清和牛奶中可以出现中药的相应成分。保健型免疫牛奶在体外有明显的抑制Hp生长作用,抗体和中药对Hp生长有协同抑制作用;对动物Hp感染模型有一定的治疗作用,但难于根除;对预防动物感染Hp具有可靠的预防作用。保健型免疫牛奶配合西药三联疗法治疗临床病例,对于改善中医临床证候具有显著的临床疗效;能减轻后者的副作用;对于根除Hp感染可能具有一定的辅助治疗作用;治疗转阴后,服用保健型免疫牛奶具有可靠的预防Hp再感染的作用。