论文摘要
目的:观察白藜芦醇苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后急性损伤及长期给药后运动功能康复的影响。并在此基础上探讨白藜芦醇苷的作用机制。体外培养PC12细胞,建立氧糖剥夺损伤模型(oxygen-glucose deprivation,OGD),观察白藜芦醇苷对细胞形态及细胞活力的影响。方法:(1)采用栓线法制备大鼠急性局部脑缺血再灌注损伤模型(MCAO)。在剂量研究中,将大鼠随机分成7组:模型组、假手术组、阳性对照组、白藜芦醇苷各剂量组(5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg)。观察白藜芦醇苷对大鼠缺血大脑的梗塞面积及含水量的影响。(2)较长周期给药实验中,将大鼠随机分成6组:模型组、假手术组、阳性对照组、白藜芦醇苷高、中、低各剂量组,造模成功后第2、第4、第6、第8天,称量体重,分别采用姿势反射试验、肢体不对称试验两种方法作为行为学评价指标,观察白藜芦醇苷对大鼠缺血大脑的保护作用。(3)体外培养PC12细胞,应用化学方法建立细胞OGD损伤模型,观察细胞形态学改变,并且应用四甲基偶氮唑蓝法(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)观察不同浓度白藜芦醇苷对细胞活力的影响,测定细胞外液乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase, LDH)浓度,一氧化氮(NO)及丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:(1)与大鼠模型组(28.30±7.92)比较,应用白藜芦醇苷后大鼠脑梗塞面积逐渐降低呈浓度依赖趋势分别为19.21±14.72、15.32±13.53、14.47±10.85、13.74±12.89。与大鼠模型组(65.81±1.75)比较,应用白藜芦醇苷后大鼠水肿程度逐渐降低呈浓度依赖趋势分别为64.27±1.45、63.91±1.53、63.68±1.80、63.57±1.65。白藜芦醇苷5mg/kg组有改善效果但无统计学意义。(2)较长周期给药后体重变化率及行为学评价结果显示:i体重变化率:假手术组除术后第1天体重下降,其余每天体重呈增长趋势。模型组由于缺血再灌注引起的损伤,造成体重呈下降趋势。(各时间点与给药前比较)体重变化率,与假手术组同时间点(1.26±8.40、4.44±6.84、7.22±6.18、10.80±5.81)比较,模型组造模后第2天、4天、6天和8天有显著性增加(-7.61±5.71、-10.57±10.49、-12.40±12.29、-12.05±13.52),有显著性差异(P<0.01)。白藜芦醇苷低、中、高剂量组(5、10、20mg/kg)给药后可改善缺血再灌注引起的体重下降。同时间点体重变化率与模型组比较,中剂量组造模后第2天、4天和6天有显著性降低(-9.07±3.85、-9.44±11.97、-10.90±15.82),有显著性差异(P<0.05);高剂量组造模后第4天和6天有显著性降低(-12.15±12.80、-13.25±13.89),有显著性差异(P<0.05);阳性对照组给药可改善缺血再灌注引起的体重下降(-9.58±3.09、-9.12±6.56、-9.43±7.67、-7.50±8.46),且有显著性差异(P<0.05)。ii姿势反射试验:造模后第2天、4天、6天和8天各时间点与假手术组(0±0)比较,模型组有显著性增加(1.42±0.48、1.36±0.33、1.29±0.51、0.91±0.30),具有显著性差异(P<0.01)。白藜芦醇苷低、中、高剂量组(5、10、20mg/kg)给药后可改善缺血再灌注引起的肢体功能异常。与模型组比较,高剂量组能显著性降低缺血再灌注引起的肢体功能异常(1.01±0.37、0.78±0.42、0.77±0.28、0.59±0.39),具有显著性差异(P<0.01)。与模型组比较,低、中剂量组在造模后第4天能显著性降低缺血再灌注引起的肢体功能异常(1.06±0.29、1.01±0.30),有显著性差异(P<0.05);阳性对照组给药可显著性降低缺血再灌注引起的肢体功能异常(1.08±0.31、0.78±0.31、0.87±0.63、0.64±0.44),且有显著性差异(P<0.05)。iii肢体不对称试验:与假手术组(9.5±21.51、-0.75±25.77、4.25±23.64、4±24.42)比较,造模后第2天、4天、6天和8天各时间点模型组前肢不对称应用评分均显著升高(66.43±32.78、69.29±23.69、50.36±17.81、51.79±40.03),具有显著性差异(P<0.05)。白藜芦醇苷低、中、高剂量组(5、10、20mg/kg)给药后可改善缺血再灌注引起的左前肢触及桶壁频率较少,右前肢触及桶壁频率较多。与模型组比较,高剂量组在造模后第2天、4天和6天能显著下降前肢不对称应用评分(35.67±34.69、29±27.33、28.33±27.82),具有显著性差异(P<0.05)。与模型组比较,低、中剂量组在造模后第4天能显著下降前肢不对称应用评分(47.5±18.60、46.88±19.07),具有显著性差异(P<0.05);阳性对照组在造模后第2天、4天和6天能显著下降前肢不对称应用评分(26.56±29.98、44.38±28.57、33.13±27.5),且有显著性差异(P<0.05)。白藜芦醇苷能显著改善缺血引起的大鼠肢体活动障碍。(3)氧糖剥夺损伤后,PC12细胞形态发生了一定的改变,白藜芦醇苷12.5μM, 25μM,50μM三个剂量组显著降低了氧糖剥夺对PC12细胞成的损伤:PC12细胞的A值由模型的70.45±2.94增加到74.2±3.88、92.55±5.08、90.3±4.55;且有显著性差异(P<0.05)。与模型组705.85±30.65相比,应用白藜芦醇苷后PC12细胞各组细胞外液LDH活力(U/L)也逐渐降低呈浓度依赖趋势LDH分别为630.76±31.28、619.72±23.91、599.34±37.54,且有显著性差异(P<0.05)。与模型组11.09±1.1相比,应用白藜芦醇苷后PC12细胞各组细胞外液MDA含量(nmol/mg)也逐渐降低呈浓度依赖趋势MDA分别为9.43±0.53、9.27±0.84、7.82±0.63,且有显著性差异(P<0.05)。与模型组16.69±0.3相比,应用白藜芦醇苷后PC12细胞各组细胞外液SOD活性(U/mg)也逐渐增高呈浓度依赖趋势SOD分别17.67±0.23、18.79±0.26、18.68±0.15,且有显著性差异(P<0.05)。与模型组42.25±0.92相比,应用白藜芦醇苷后PC12细胞各组细胞外液NO含量(μmol/g)也逐渐降低呈浓度依赖趋势NO分别为31.25±2.11、25.88±2.06、25.38±2.73,且有显著性差异(P<0.05)。结论:白藜芦醇苷对大鼠缺血大脑有保护作用,能明显减少大脑的梗塞面积和水肿程度,改善缺血引起的肢体行为障碍;离体细胞实验表明白藜芦醇苷对PC12细胞氧糖剥夺损伤具有保护作用。
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