人EG细胞分离、培养及其定向诱导为造血细胞的实验研究

论文题目: 人EG细胞分离、培养及其定向诱导为造血细胞的实验研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 药理学

作者: 刘永刚

导师: 王亚平

关键词: 原始生殖细胞,胚胎生殖细胞,胚胎肺成纤维细胞,冻存,复苏,扩增,分化

文献来源: 重庆医科大学

发表年度: 2005

论文摘要: 人胚胎多能性干细胞主要来源于胚泡内细胞团和原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs),在体外经抑制分化培养而得到的细胞系,其具有体外无限增殖能力和发育全能性等特征。人胚胎性干细胞的研究已成为当今生命科学领域内最为热门,最具活力,最为前沿的课题之一。人胚胎性干细胞研究的意义主要体现在:作为发育生物学的理想研究模型,可较为精确的了解人胚胎早期发育机制及相关调控因素;人胚胎性干细胞具有无限增殖和多向分化能力,能为组织工程和细胞工程提供无限的种子细胞,是细胞、组织、器官移植研究的基础模型;胚胎性干细胞的遗传可操作性,使之成为基因和细胞治疗的载体模型等。事实上各国科学家都在通过各种渠道,投入巨资加快干细胞的研究。谁在此领域抢得失机,将会为全球社会经济发展和人民健康做出巨大贡献。因此,建立胚胎干细胞系或者建立胚胎干细胞库是当今各国研究者当务之急。 迄今为止,人胚胎性干细胞的研究主要集中在来源于胚泡内细胞群的胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)系的研究,且在已有研究中主要用鼠胚胎成纤维细胞作为培养人胚胎干细胞的饲养层,而以人胚胎成纤维细胞作为饲养层培养人胚胎干细胞的报道甚少。来源于原始生殖细胞的人胚胎生殖细胞(embryonic germ cell, EGC)系仅有一例建系成功,而国内尚无成功建立 hEGCs 系的报道。因此,对于来源于原始生殖细胞的人胚胎生殖细胞的研究仍然具有十分重要的意义。 为了更深入的认识人 EG 细胞,我们进行了以下研究:1. 进一步研究了人胚胎原始生殖细胞的发生、迁移及表型特征。2. 采用低温生物学技术,对第 6-8 周人胚胎生殖嵴原始生殖细胞进行冷冻、复苏,探讨低温冷冻保存人胚胎原始生殖细胞的可行性。3.以第 3-5 月人胚胎肺为材料分离、纯化、培养并鉴定人胚胎肺成纤维细胞,筛选丝裂霉素 C 抑制人胚胎肺成纤维细胞增殖的最佳作用时间和浓度。4. 以自行分离、培养的人胚胎肺成纤维细胞为饲养层细胞,分离和培养了人胚胎生殖细胞,并进行鉴定。5.在成功分离、培养和鉴定人 EG 细胞的同时,比较了 STO 细胞和人胚胎肺成纤维细胞作为饲养层细胞对人 EG细胞生长的影响。6. 采用分步法,以可溶性细胞因子组合为诱导剂,定向诱导人 EG 细胞向造血细胞分化,为胚胎干细胞的定向诱导分化和今后可能在临床移植治疗中的应用进行了初步探索。 1. 人胚胎原始生殖细胞的发生、迁移及表型特征: 采用石蜡切片、酶组织化学检测碱性磷酸酶活性、免疫组化检测阶段特异性胚胎系列抗原(如 SSEA-1,SSEA-4 抗原)、RT-PCR 检测转录因子 Oct-4 的表达等技术方法,研究 4.5-12 周人胚胎生殖嵴的组织结构以及在迁移中的原始生殖细胞形态学特征及变化。旨在为深入认识人 PGCs 生物学特征和以生殖嵴为材料获取人胚胎生殖细胞奠定基

论文目录:

符号说明

中文摘要

英文摘要

正文 人 EG 细胞分离、培养及其定向诱导为造血细胞的实验研究

第一部分 人胚胎原始生殖细胞的发生、迁移及表型特征

前言

材料和方法

结果

讨论

小结

参考文献

图片

第二部分 人胚胎性干细胞饲养层体系的建立

前言

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

图片

第三部分 人胚胎生殖细胞的分离、纯化、鉴定与体外培养

前言

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

图片

第四部分 人胚胎原始生殖细胞的冻存与复苏

前言

材料和方法

结果

讨论

小结

参考文献

图片

第五部分 以STO 细胞和hELF 细胞作为胚胎生殖细胞培养饲养层的比较

前言

材料和方法

结果

讨论

小结

参考文献

图片

第六部分 人胚胎生殖细胞定向诱导为造血细胞的初探

前言

材料和方法

结果

讨论

小结

参考文献

图片

致谢

攻读博士学位期间撰写发表的论文及承担的课题

发布时间: 2005-07-22

参考文献

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