大豆皂苷的分离检测

论文摘要

大豆皂苷（Soyasaponins）是大豆中含有的一类重要的生物活性成分。近年研究表明,大豆皂苷具有显著的降血脂和抗动脉粥样硬化等多种重要的生理功能,可开发成保健食品或药品,同时它还是一种重要的发泡剂、乳化剂、稳定剂和风味改良剂,市场潜力大。本文以脱脂大豆胚芽为原料,通过溶剂浸提,大孔吸附树脂（Macroporous Absorbent Resin, MAR）与阳离子交换树脂（Cation Exchange Resins, CER）联用富集、纯化总皂苷,凝胶渗透色谱（Gel Permeation Chromatography, GPC）进一步去杂,利用制备高效液相色谱（Preparative- High Performance Liquid Chromatography, PRE-HPLC）,蒸发光散射检测器（Evaporative Light Scattering Detector, ELSD）与二极管阵列检测器（Photodiode Array Detector,PAD）并用,液相色谱-质谱（Liquid Chromatography- Mass Spectrometer, LC-MS）联用分析,分离,制备大豆皂苷单体（single purified soy saponins）。在此基础上,建立了大豆皂苷的高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）内标定量方法与苷元比色定量方法。研究的主要结果如下:成功分离出5种大豆皂苷单体,通过高效液相色谱-电喷雾电离质谱（ liquid Chromatography-Electronic Spray Ion/Mass Spectrometer,LC-ESI/MS）方法分析确认其各自皂苷种类。5种皂苷单体分别为大豆皂苷Aa, Ab, Ba, Bb, Be。通过ELSD-HPLC分析,5种大豆皂苷单体的峰面积百分数都高达95%以上。建立了以马萘雌酮为内标物,通过ELSD-HPLC内标法测定大豆皂苷Ab、Bb的定量方法。各自分别在0.1～0.5mg/mL范围内呈良好的线性关系。大豆皂苷Ab线性回归方程为:lgy = 1.6658lgx-0.7123, R2 = 0.9995。回收率在98.2%～100.3%之间,具有较高的回收率、稳定性和重现性。大豆皂苷Bb线性回归方程为:lgy = 1.8734lgx-0.9667, R2 = 0.9998。回收率在97.7%～100.2%之间,具有较高的回收率、稳定性和重现性。通过大豆皂苷Ab可定量A组大豆皂苷,通过大豆皂苷Bb可定量B组大豆皂苷。并通过此两组皂苷计算大豆总皂苷含量。同时以香草醛-高氯酸为显色剂、冰醋酸为溶剂,自制高纯度大豆皂苷Bb为标准品,通过大豆皂苷苷元显色,在563nm处测定大豆皂苷元的含量,建立了利用大豆皂苷元特征显色方法定量测定大豆总皂苷含量的方法。在0.0106～0.0743μmol皂苷元范围内呈良好的线性关系,回归方程为y = 12.331x-0.0555, R2 = 0.9985。回收率在95.48%～102.93%之间,具有较高的回收率,稳定性和重现性。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 1.1 引言
• 1.2 大豆皂苷综述
• 1.2.1 大豆皂苷的分布含量
• 1.2.2 大豆皂苷的分类、结构和化学组成
• 1.2.3 大豆皂苷的生物活性
• 1.2.4 大豆皂苷提取
• 1.2.5 大豆皂苷纯化
• 1.2.6 大豆皂苷定量分析
• 1.2.7 大豆皂苷的应用及其前景
• 1.3 实验目的和意义
• 参考文献
• 第二章 大豆皂苷单体的分离制备
• 2.1 仪器与材料
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 大豆皂苷粗提物的准备
• 2.2.2 HPLC 制备大豆皂苷
• 2.2.3 液相色谱-质谱联用对单体大豆皂苷的确认
• 2.3 试验结果
• 2.4 讨论
• 2.5 本章小结
• 参考文献
• 第三章：ELSD-HPLC 测定大豆皂苷含量
• 3.1 仪器与材料
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 对照品溶液的制备
• 3.2.2 供试品溶液的制备
• 3.2.3 高效液相色谱分析条件的选择
• 3.2.4 线性关系考察
• 3.2.5 精密度试验
• 3.2.6 重复性试验
• 3.2.7 回收率试验
• 3.2.8 样品测定
• 3.3 实验结果
• 3.3.1 线性关系考察
• 3.3.2 精密度试验
• 3.3.3 重复性试验
• 3.3.4 回收率实验
• 3.3.5 样品含量测试
• 3.4 讨论
• 3.5 本章小结
• 参考文献
• 第四章：基于苷元特征显色检测大豆总皂苷方法的建立
• 4.1 仪器与材料
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 苷元标样溶液的制备
• 4.2.2 样品溶液的制备
• 4.2.3 检测波长的选择与干扰试验
• 4.2.4 标准曲线的建立
• 4.2.5 稳定性实验
• 4.2.6 精密度实验
• 4.2.7 检测限的考察
• 4.2.8 回收率实验
• 4.2.9 样品皂苷含量测定
• 4.3 结果
• 4.3.1 检测波长的选择与干扰实验
• 4.3.2 显色的稳定性
• 4.3.3 回归曲线
• 4.3.4 检测限的确定
• 4.3.5 精密度试验
• 4.3.6 加标回收试验
• 4.3.7 样品皂苷含量测定结果
• 4.4 讨论
• 4.5 本章小结
• 参考文献
• 展望
• 致谢
• 攻读学位期间已发表或录用的学术论文