论文摘要
副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis, Hps）是一种多形性的革兰氏阴性短杆菌,属巴斯德杆菌科嗜血杆菌属,是一种存在于猪上呼吸道的共栖菌。在特定条件下该菌可引起猪的以多发性浆膜炎、关节炎、脑膜炎为主要特征的猪格氏病,具有较高死亡率。该菌具有15个血清型,各菌株之间缺乏交叉保护性,其毒力因子和致病机制仍不十分清楚。外膜蛋白是副猪嗜血杆菌的可能的毒力因子之一,而由ompP5基因编码的外膜蛋白P5,是副猪嗜血杆菌主要外膜蛋白之一,是该菌的一种主要粘附蛋白,与细菌的定植有关,是一种可能的保护性抗原。因此本试验将重组表达的副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5刺激树突状细胞（dendritic cell, DC）,观察其对树突状细胞成熟的影响,并进行免疫保护性实验。具体试验和结果如下：1.以GM-CSF、IL-4联合诱导骨髓细胞生成未成熟DC,加入不同剂量副猪嗜血杆菌重组外膜蛋白P5刺激,获得具有典型树突状突起形态的DC。其中经5μg/mL P5刺激的DC较对照组IL-6、TNF-α分泌量显著增加（P<0.01）,IL-12的分泌量有所增加（P>0.05）；50μg/mL P5刺激的DC较对照组IL-6分泌量增加（P<0.01）, IL-12p70和TNF-α分泌量均下降（P<0.01）。P5诱导后的DC刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力增强（P<0.01）。显示P5能影响骨髓细胞来源的DC分化、成熟及功能的发挥,且不同剂量的P5对DC的成熟程度影响有差异。2.将重组表达的副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5与弗氏佐剂混合乳化制备免疫原,免疫豚鼠,并以副猪嗜血杆菌灭活疫苗作为阳性对照,无菌PBS作为阴性对照。以间接ELISA和MTT评价P5免疫豚鼠后体液免疫和细胞免疫水平,并以2×LD50菌数的副猪嗜血杆菌菌液对免疫后豚鼠进行腹腔注射攻毒。结果显示重组蛋白免疫组和灭活疫苗免疫组对血清5型菌株H45的攻毒保护率为50%；重组蛋白免疫组对血清4型和血清12型的菌株的攻毒保护率为17%,阴性对照组的豚鼠6只均死亡,存活率为0%。试验表明重组外膜蛋白P5对血清5型菌株有50%的免疫保护,对其他血清型的免疫保护力较弱。本研究成功培养出了具有典型树突状突起的豚鼠DC细胞,发现P5蛋白能刺激DC成熟,免疫豚鼠后具有50%的免疫保护性,是一种副猪嗜血杆菌潜在的亚单位疫苗候选抗原。