黄芪多糖抑制气道平滑肌细胞α-SMA的表达

论文摘要

目的：支气管哮喘（哮喘）是一种由多种炎性细胞、结构细胞及细胞组分共同参与的慢性气道炎性疾病,其中气道平滑肌形态功能的异常在哮喘的发生发展中发挥重要作用,α-平滑肌肌动蛋白（a-SMA）为气道主要的收缩及结构蛋白,在气道平滑肌收缩、迁移及生长中具有重要作用,其高表达可引起哮喘的气道高反应性,加重气道重构。黄芪多糖（APS）为中药黄芪中最主要的药理成分,与脂多糖（LPS）有类似的多糖结构,可作用于细胞膜的Toll样受体4（TLR4）,对机体存在免疫调节等多种作用,可用于肿瘤、糖尿病、肾病综合征及提高免疫力的治疗,且可抑制哮喘小鼠模型α-平滑肌肌动蛋白的高表达,但其对人气道平滑肌a-SMA表达的影响尚无明确报道。本研究通过体外培养人气道平滑肌细胞（ASMC）,研究APS对人ASMCa-SMA表达的影响,并初步探讨其可能的作用机制,从而为临床治疗哮喘提供新的治疗方法。方法：由膜荚黄芪参照传统的水煮醇沉法提取APS,培养人ASMC系,设APS20μg/mL、100μg/mL、500μg/mL3种浓度组及对照组、LPS组和TLR4拮抗剂组,并应用PMB预处理APS以排除可能存在的LPS的污染作用。转化生长因子-p（TGF-p）诱导细胞a-SMA的高表达,细胞免疫化学染色、Western blot及PCR技术检测各组a-SMA及其mRNA的水平,其表达水平的高低用相对比值表示,每组实验重复3次。实验数据用SPSS软件处理,计量资料实验数据以均数±标准差（x±s）表示,取α为0.05,多组间差异用单因素方差分析,两组间差异用t检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果：1.APS对α-SMA表达的影响呈现一定的浓度-效应关系TGF-β可明显增强α-SMA的表达,与阴性对照组相比,100、500μg/mL剂量组的α-SMA表达水平降低（P<0.01）,而20μg/mL剂量组与阴性对照组无明显变化,提示中高浓度的APS具有对α-SMA表达的抑制作用,而低浓度组无这种作用。2.APS对α-SMA表达的影响发生在基因转录水平与阴性对照组相比,100、500μg/mL剂量组mRNA降低（P<0.01）,而20μg/mL剂量组无明显变化。提示APS影响α-SMA的mRNA表达,而且与α-SMA的表达呈相应的变化关系。3.APS对α-SMA表达的影响与LPS的污染无关PMB可与LPS的脂质A结合而阻断LPS的活性,本研究发现,PMB预处理的LPS对α-SMA的抑制作用明显减弱,而PMB预处理的APS对α-SMA的抑制作用无明显变化,可排除LPS对APS的污染作用。4.APS可能通过TLR4抑制α-SMA的表达与500μg/mL剂量组相比,TLR4抑制剂组可上调α-SMA的表达水平（P<0.01）、升高α-SMA mRNA的水平（P<0.01）,但较阴性对照组（B组）仍有差异（P<0.01）。结论：1.中高浓度的APS可抑制由TGF-β诱导的ASMCa-SMA的高表达。2.APS通过TLR4发挥这种浓度依赖性的抑制作用。3.APS可能成为防治哮喘的新药物。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 附表及附图
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士期间发表的学术论文
• 学位论文评阅及答辩情况表